Struktura dhe përbërja kimike
Virusi i influencës ka formë sferike, me diametër 80-120 nm. Format filamentoze janë më pak të zakonshme. Nukleokapsidi spirale është një varg ribonukleoproteine me spirale të dyfishtë (RNP) që formon bërthamën e virionit. ARN polimeraza dhe endonukleazat (P1 dhe P3) shoqërohen me të. Bërthama është e rrethuar nga një membranë e përbërë nga proteina M, e cila lidh RNP me shtresën e dyfishtë lipidike të guaskës së jashtme dhe proceset stiloid, të përbërë nga hemagglutinina dhe neuraminidaza. Virionet përmbajnë rreth 1% ARN, 70% proteina, 24% lipide dhe 5% karbohidrate. Lipidet dhe karbohidratet janë pjesë e lipoproteinave dhe glikoproteinave të shtresës së jashtme dhe janë me origjinë qelizore. Gjenomi i virusit përfaqësohet nga një molekulë e fragmentuar e ARN-së me fije minus. Viruset e gripit të tipit A dhe B kanë 8 fragmente ARN. Prej tyre 5 kodojnë një proteinë secila dhe 3 të fundit kodojnë dy proteina secila.Antigjenet
Viruset e influencës A, B dhe C ndryshojnë nga njëri-tjetri në antigjenin tip-specifik të lidhur me RNP (proteina NP) dhe proteinën e matricës M që stabilizon strukturën e virionit.Këto antigjene zbulohen në CSC. Specifikimi më i ngushtë i virusit të tipit A përcaktohet nga dy antigjenë të tjerë sipërfaqësor - hemagglutinina H dhe neuraminidaza N, të shënuara me numra serialë. Hemaglutinina është një glikoproteinë komplekse me veti mbrojtëse. Indukton në trup formimin e antitrupave neutralizues të virusit - antihemaglutininave, të zbuluara në RTGA. Ndryshueshmëria e hemagglutininës (H-antigjen) përcakton zhvendosjen dhe zhvendosjen antigjenike të virusit të influencës. Zhvendosja antigjenike kuptohet si ndryshime të vogla në antigjenin H të shkaktuara nga mutacionet pikësore në gjenin që kontrollon formimin e tij. Ndryshime të tilla mund të grumbullohen tek pasardhësit nën ndikimin e faktorëve selektivë siç janë antitrupat. Kjo përfundimisht çon në një zhvendosje sasiore, e shprehur në një ndryshim në vetitë antigjenike të hemagglutininës. Me zhvendosjen antigjenike, ndodh një zëvendësim i plotë i gjenit, i cili mund të bazohet në rikombinimin midis dy viruseve. Kjo çon në një ndryshim në nëntipin e hemagglutininës ose neuraminidazës, dhe nganjëherë të dy antigjeneve, dhe shfaqjen e varianteve thelbësisht të reja antigjenike të virusit që shkaktojnë epidemi dhe pandemi të mëdha.Hemagglutinina është gjithashtu një receptor me anë të të cilit virusi absorbohet në qeliza të ndjeshme. , duke përfshirë eritrocitet, duke i bërë ato të ngjiten së bashku, dhe është i përfshirë në hemolizën e eritrociteve.Neuraminidaza virale është një enzimë që katalizon shkëputjen e acidit sialik nga substrati. Ka veti antigjenike dhe në të njëjtën kohë merr pjesë në çlirimin e virioneve nga qeliza bujtëse. Neuraminidaza, si hemagglutinina, ndryshon si rezultat i zhvendosjes dhe zhvendosjes antigjenike.Kultivimi dhe riprodhimi
Viruset e gripit kultivohen në embrionet e pulave dhe në kulturat e qelizave. Mjedisi optimal janë embrionet e pulës, në zgavrën amniotike dhe alantoike të të cilave virusi riprodhohet për 36-48 orë.Më të ndjeshmet ndaj virusit të gripit janë kulturat primare të qelizave të veshkave të embrionit të njeriut dhe të disa kafshëve. Riprodhimi i virusit në këto kultura shoqërohet me CPP të lehtë, që i ngjan degjenerimit spontan të qelizave. Viruset e influencës absorbohen në receptorët glikoproteinikë të qelizave epiteliale, në të cilët depërtojnë nga endocitoza e receptorit. Transkriptimi dhe riprodhimi i gjenomit viral ndodh në bërthamën e qelizës. Në këtë rast, fragmentet individuale të ARN-së të lexuara në formën e mARN-së përkthehen në ribozome, ku sintetizohen proteinat specifike për virusin. Pas replikimit të gjenomit viral, formohet një grup ARN virale, e cila përdoret në montimin e nukleokapsideve të reja.Patogjeneza
Riprodhimi primar i virusit ndodh në qelizat epiteliale të traktit respirator. Nëpërmjet sipërfaqes së gërryer të mukozës, virusi hyn në qarkullimin e gjakut, duke shkaktuar viremi. Qarkullimi i virusit në gjak shoqërohet me dëmtime të qelizave endoteliale të kapilarëve të gjakut, duke rezultuar në rritjen e përshkueshmërisë së tyre. Në raste të rënda vërehen hemorragji në mushkëri, muskul të zemrës dhe organe të tjera të brendshme. Viruset e gripit, duke hyrë në nyjet limfatike, dëmtojnë limfocitet, duke rezultuar në mungesë të imunitetit të fituar, e cila kontribuon në shfaqjen e infeksioneve dytësore bakteriale.Gripi shkakton intoksikim të trupit me ashpërsi të ndryshme.Imuniteti
Mekanizmi i imunitetit kundër gripit lidhet me faktorë natyrorë të mbrojtjes jospecifike antivirale, kryesisht me prodhimin e interferonit dhe qelizave vrasëse natyrale.Imuniteti specifik sigurohet nga faktorët e përgjigjes qelizore dhe humorale. Të parët përfaqësohen nga makrofagët dhe T-vrasësit. E dyta - imunoglobulinat, kryesisht antihemaglutininat dhe antitrupat antineurominidazë, të cilat kanë veti neutralizuese të virusit. Këto të fundit, ndryshe nga antihemaglutininat, neutralizojnë vetëm pjesërisht virusin e gripit, duke parandaluar përhapjen e tij. Antitrupat fiksues të komplementit ndaj nukleoproteinës virale nuk kanë veti mbrojtëse dhe pas 1.5 muajsh. zhduken nga gjaku i konvaleshentëve Antitrupat gjenden në serumin e gjakut 3-4 ditë pas fillimit të sëmundjes dhe arrijnë titrat maksimalë pas 2-3 javësh. Kohëzgjatja e imunitetit specifik të fituar pas një infeksioni të gripit, në kundërshtim me idetë e mëparshme, matet në disa dekada. Ky përfundim u arrit në bazë të një studimi të strukturës moshore të incidencës së gripit të shkaktuar nga virusi A (H1N1) në vitin 1977. U konstatua se ky virus, i cili kishte munguar që nga viti 1957, prekte në vitin 1977 vetëm persona jo më i vjetër se 20 vjet. Kështu, pas pësuar një infeksion gripi të shkaktuar nga virusi i gripit të tipit A, formohet imunitet intensiv, rreptësisht specifik për nëntipin e virusit (nga antigjenet H- dhe N) që shkaktoi formimin e tij. Përveç kësaj, të sapolindurit kanë imunitet pasiv për shkak të antitrupave të klasës IgG ndaj nëntipit përkatës të virusit A. Imuniteti vazhdon për 6-8 muaj.Epidemiologjia
Burimi i infeksionit janë njerëzit e sëmurë dhe bartësit e virusit. Transmetimi i patogjenit ndodh me anë të pikave ajrore. Gripi i referohet infeksioneve epidemike që ndodhin shpesh në muajt dimër dhe dimër-pranverë. Përafërsisht çdo dhjetë vjet, epidemitë e gripit marrin formën e pandemisë, duke mbuluar popullsinë e kontinenteve të ndryshme. Kjo është për shkak të ndryshimit në antigjenet H- dhe N të virusit të tipit A të lidhur me zhvendosjen dhe zhvendosjen antigjenike. Për shembull, virusi i influencës A me hemaglutininë NSW1 shkaktoi pandeminë e gripit spanjoll në 1918, e cila mori 20 milionë jetë njerëzish. Në vitin 1957, virusi "aziatik" i gripit (H2N2) shkaktoi një pandemi që preku më shumë se 2 miliardë njerëz. Në vitin 1968 u shfaq një variant i ri pandemik, virusi i influencës A (H3N2), i quajtur "virusi i Hong Kongut", i cili vazhdon të qarkullojë edhe sot e kësaj dite. Në vitin 1977 iu bashkua një virus i tipit A (H1N1), i cili ishte i papritur, pasi një virus identik qarkullonte tashmë në vitet 1947-1957 dhe më pas u zëvendësua plotësisht nga nëntipi "Aziatik". Në këtë drejtim, u ngrit një hipotezë se variantet e zhvendosjes së virusit nuk janë historikisht të reja. Janë serosubtipe që qarkullojnë vitet e kaluara.Ndërprerja e qarkullimit të virusit të gripit që shkaktoi një epidemi tjetër shpjegohet me imunitetin kolektiv të popullatës që është zhvilluar ndaj këtij varianti antigjenik të patogjenit. Në këtë sfond, bëhet përzgjedhja e varianteve të reja antigjenike, imuniteti kolektiv ndaj të cilëve nuk është formuar ende. Nuk është ende e qartë se ku janë zhvendosur variantet antigjenike (serosubtipat) të virusit të gripit të tipit A që kanë lënë qarkullimin aktiv në një periudhë të caktuar historike. ruhen për një kohë të gjatë. Është e mundur që rezervuari i viruseve të tilla të jenë kafshët e egra dhe shtëpiake, veçanërisht shpendët, të cilët janë të infektuar me variante njerëzore të viruseve të influencës A dhe i mbajnë ato në qarkullim për një kohë të gjatë. Në të njëjtën kohë, në trupin e shpendëve ndodhin rikombinime gjenetike midis viruseve të shpendëve dhe atyre të njeriut, të cilat çojnë në formimin e varianteve të reja antigjenike.Sipas një hipoteze tjetër, viruset e gripit të të gjitha nënllojeve të njohura qarkullojnë vazhdimisht në popullatë, por bëhen epidemikisht të rëndësishme. vetëm me ulje të imunitetit kolektiv.Viruset e gripit të tipit B dhe C kanë një stabilitet më të lartë antigjenik. Viruset e gripit të tipit B shkaktojnë epidemi më pak intensive dhe shpërthime të lokalizuara. Virusi i gripit të tipit C është shkaktar i sëmundjeve sporadike. Virusi i influencës shkatërrohet me shpejtësi nga temperaturat mbi 56°C, rrezatimi UV, dezinfektuesit, detergjentët. Ajo ruan qëndrueshmërinë e saj për 1 ditë. në temperaturën e dhomës, në sipërfaqe të lëmuara metalike dhe plastike - deri në 2 ditë. Viruset e gripit mbijetojnë në temperatura të ulëta (-70°C).Profilaksia specifike
Për parandalimin e gripit përdoret rimantadina, e cila shtyp riprodhimin e virusit të gripit të tipit A. Për profilaksinë pasive përdoret imunoglobulina humane kundër gripit e marrë nga serumi i gjakut i dhuruesve të imunizuar me vaksinën e gripit. Interferoni i leukociteve njerëzore ka një efekt të caktuar.Për vaksinim përdoren vaksina të gjalla dhe të inaktivuara. Me futjen e vaksinave të gjalla, formohet imuniteti i përgjithshëm dhe lokal. Veç kësaj, vërehet induksioni i interferonit.Për momentin janë marrë vaksina të inaktivuara të llojeve të ndryshme: virion, nënnjësi, split dhe miks. Vaksinat e Virionit merren nga pastrimi me cilësi të lartë të viruseve të rritura në embrionet e pulave. Vaksinat nën-njësi janë antigjene të pastruara sipërfaqësore të virusit të influencës - hemagglutinina dhe neuraminidaza. Preparate të tilla vaksinash karakterizohen nga reaktogjeniteti i ulët dhe imunogjeniteti i lartë. Vaksinat e ndara ose të shpërbëra merren nga një pezullim i pastruar i virioneve me trajtim me detergjentë. Megjithatë, ende nuk ka konsensus mbi përfitimet e ndonjërës prej këtyre vaksinave. Vaksinat e inaktivuara nxisin një përgjigje imune në sistemin e imunitetit humoral të përgjithshëm dhe lokal, por në një masë më të vogël se vaksinat e gjalla nxisin sintezën e interferonit.Përvoja shumëvjeçare në përdorimin e vaksinave të gjalla dhe të inaktivuara tregon se mospërputhja antigjenike e shtameve të vaksinës me shtame epidemike është arsyeja kryesore, por jo e vetmja, efektiviteti i ulët i vaksinimit të gripit. Vitet e fundit, janë bërë përpjekje për të krijuar vaksina të influencës të modifikuara gjenetikisht dhe sintetike.Gripi
Gripi është një sëmundje akute e frymëmarrjes tek njerëzit që tenton të përhapet në mënyrë epidemike. Karakterizohet nga inflamacioni kataral i traktit të sipërm respirator, ethe, intoksikim të rëndë të përgjithshëm. Influenca shpesh shoqërohet me shfaqjen e komplikacioneve të rënda - pneumoni bakteriale dytësore, përkeqësim të sëmundjeve kronike të mushkërive.Patogjenët e gripit i përkasin familjes Orthomyxoviridae. Ai përfshin tre gjini virusesh - A, B, C. Virusi i influencës ka një formë sferike, dimensionet e tij janë 80-120 nm. Ndonjëherë formohen virione filamentoze. Gjenomi formohet nga një varg negativ me një fije ARN, i cili përbëhet nga tetë fragmente dhe është i rrethuar nga një kapsid proteine. ARN e lidhur me 4 proteina të brendshme: nukleoproteinat (NP) dhe proteinat me peshë të lartë molekulare PI, P2, P3 të përfshira në transkriptimin e gjenomit dhe replikimin e virusit. Nukleokapsidi ka simetri spirale. Mbi membranën e kapsidës është një shtresë e proteinës së matricës (proteina M). Në membranën e jashtme, superkapside, hemagglutinina (H) dhe neuraminidaza (N) janë të vendosura në formën e gjembave. Të dy glikoproteinat (N dhe H) kanë veti të theksuara antigjenike. Në viruset e gripit janë gjetur 13 lloje të ndryshme antigjenike të hemagglutininës (NI-13) dhe 10 variante të neuraminidazës (N1-10).Sipas antigjenit të brendshëm nukleoproteinik dallohen tre lloje të viruseve të influencës - A, B, C, të cilat. mund të përcaktohet në RSK. Viruset e tipit A që infektojnë njerëzit kanë tre lloje hemagglutinine (HI, H2, H3) dhe dy lloje të neuraminidazës (N1, N2). Në varësi të kombinimeve të tyre, ekzistojnë variante të viruseve të influencës A - H1N1, H2N2, H3N2. përcaktohen në reaksionin e frenimit të hemaglutinimit me serumet përkatëse.Viruset e influencës kultivohen lehtësisht në embrionet e pulës dhe në kultura të ndryshme qelizore. Akumulimi maksimal i viruseve ndodh pas 2-3 ditësh. Në mjedisin e jashtëm, virusi humbet shpejt infektivitetin e tij përmes tharjes. Në një temperaturë të ulët në frigorifer ruhet për një javë, në -70 ° C - shumë më gjatë. Ngrohja çon në çaktivizimin e tij pas disa minutash. Nën ndikimin e eterit, fenolit, formalinës shpejt shembet.Metoda e diagnostikimit virologjik
Tamponët nazofaringeal, rrjedhjet e hundës të marra me shtupë pambuku steril të thatë ose të lagësht në ditët e para të sëmundjes, pështymë u përdorën si material për kërkime. Viruset mund të gjenden në gjak, lëngun cerebrospinal. Në rastet fatale merren copa të indeve të prekura të rrugëve të sipërme dhe të poshtme të frymëmarrjes, trurit etj.. Marrja e strisheve nazofaringeale me stomakun bosh. Pacienti duhet të shpëlajë fytin tre herë me tretësirë sterile të klorurit të natriumit të kripur (10-15 ml), i cili mblidhet në një kavanoz steril me grykë të gjerë. Pas kësaj, një copë leshi pambuku steril fshihet me murin e pasmë të faringut, pasazhet e hundës, pastaj zhytet në një kavanoz me shpëlarje.Mund ta merrni materialin me një tampon steril të lagur në tretësirë të klorurit të natriumit, i cili fshihet me kujdes. fshihet me murin e pasmë të fytit. Pas marrjes së materialit, tamponi zhytet në një epruvetë me kripë fiziologjike, së cilës i shtohet 5% serum i inaktivuar i kafshëve. Në laborator, tamponët shpëlahen në lëng, shtrydhen në murin e epruvetës dhe hiqen. Kullimi mbahet në frigorifer për t'u vendosur, më pas pjesa e mesme e lëngut futet në epruveta sterile. Antibiotikët penicilinë (200-1000 IU/ml), streptomicinë (200-500 μg/ml), nistatin (100-1000 IU/ml) i shtohen materialit për të shkatërruar mikroflorën shoqëruese, inkubohen për 30 minuta në temperaturën e dhomës dhe përdoren. për të izoluar viruset, pasi e keni kontrolluar më parë për sterilitet Një metodë e ndjeshme për izolimin e viruseve infekton embrionet e pulës 10-11 ditëshe. Materiali në një vëllim 0,1-0,2 ml injektohet në zgavrën amniotike ose allantois. Infektoni, si rregull, 3-5 embrione. Embrionet inkubohen në temperaturën optimale 33-34°C për 72 orë. Për të rritur numrin e virioneve në materialin e provës, ai është i para-koncentruar. Për ta bërë këtë, përdorni metodat e përthithjes së viruseve në eritrocitet e pulës, trajtimi me një tretësirë të tripsinës 0,2% për të përmirësuar vetitë infektive të viruseve ose për t'i precipituar ato duke përdorur metoda speciale. Pas inkubimit, embrionet e pulës ftohen në një temperaturë prej 4 ° C për 2-4 orë, pastaj thithen pipeta sterile ose shiringë allantoisnu ose lëng amniotik. Në këtë, me ndihmën e RHA, përcaktohet prania e një virusi infektiv. Për ta bërë këtë, përzieni vëllime të barabarta (0,2 ml) të materialit virusal dhe 1% suspension të eritrociteve të pulës. Një reaksion pozitiv (prania e një virusi në material) evidentohet nga sedimentimi i eritrociteve në formën e një ombrellë.Nëse në material ka një virus që ka veti hemaglutinimi, ai titrohet duke përdorur një RGA të zgjeruar, duke përcaktuar titri i aktivitetit të hemaglutinimit. Me ndihmën e këtij reaksioni përcaktohet titri i virusit të hemaglutinimit - hollimi më i lartë i materialit, i cili ende jep reaksionin e hemaglutinimit. Kjo sasi virusi merret si një njësi hemaglutinimi (HAU).Identifikimi i viruseve të gripit duke përdorur RTGA
Për ta bërë këtë, fillimisht përgatitet një hollim pune i materialit viral, i cili përmban 4 GAO të virusit në një vëllim të caktuar. Llogaritja e reaksionit kryhet pas formimit të një sedimenti të eritrociteve në puset e kontrollit. Një reagim pozitiv dëshmohet nga një vonesë në hemaglutinimin në puset e testimit.Viruset e gripit mund të izolohen duke përdorur linja të ndryshme të kulturës qelizore - embrioni i njeriut, veshka e majmunit, linja e vazhdueshme e veshkave të qenit (MDCK) dhe të tjera. Në kulturat qelizore manifestohet efekti citopatik i viruseve (paraqitja e qelizave me buzë të skallopuara, vakuola, formimi i inkluzioneve intranukleare dhe citoplazmike), i cili përfundon me degjenerimin e monoshtresës qelizore. 1:8). Përveç këtij reagimi, RGGads mund të përdoret, megjithatë, ai është më pak i ndjeshëm dhe kërkon një titër të serumit imunitar prej të paktën 1:160, si dhe RSK, RN, PEMA, etj.Studim serologjik
Një test serologjik përdoret për të konfirmuar diagnozën e gripit. Ai bazohet në përcaktimin e një rritjeje katërfish të titrit të antitrupave në serumin e pacientit.Serumi i parë merret në fillimin e sëmundjes në periudhën akute (2-5-1 ditë sëmundje), i dyti - pas datës 10-14. ditën e sëmundjes. Meqenëse serumet mund të konsumohen njëkohësisht, i pari prej tyre ruhet në frigorifer në një temperaturë prej -20 ° C. Më shpesh përdoren RTGA, RSK, RNGA. Këto reaksione përcaktohen me grupe të veçanta të kompleteve standarde të diagnostikimit viral (shtameve referente të virusit të gripit të llojeve të ndryshme serologjike). Meqenëse serumi i pacientëve mund të përmbajë frenues jo specifikë të hemaglutinimit, ato fillimisht nxehen në një temperaturë prej 56 ° C, dhe gjithashtu trajtohen me një enzimë të veçantë (për shembull, neuraminidazë) ose zgjidhje të periodatit të kaliumit, rivanol, klorur mangani, pezullimi i gomave të bardha etj. sipas skemave të veçanta. DHEReaksioni i frenimit të hemaglutinimit
Testi i frenimit të hemaglutinimit mund të vendoset në epruveta (macroshtod) ose në pllaka të posaçme për studime imunologjike.Reaksioni konsiderohet pozitiv kur formohet një sediment kompakt, i dendur eritrocitar me buzë të lëmuara.Diagnostikimi i shprehur
Metoda bazohet në zbulimin e antigjeneve specifike virale në materialin e testimit duke përdorur imunofluoreshencë në RIF direkte ose indirekte. Mukusi merret nga pasazhet e hundës ose muri i pasmë i faringut, centrifugohet dhe përgatiten njolla nga sedimenti i qelizave të epitelit cilindrik të mukozës në rrëshqitjet e qelqit. ato trajtohen me serume imunofluoreshente të konjuguara me fluorokrome, si p.sh. FITC (izotiocianati i fluoresceinës). Me rastin e ekzaminimit të preparateve me mikroskop lumineshent vihet re një shkëlqim karakteristik i verdhë në të gjelbër të viruseve të influencës, të cilët lokalizohen në fillimin e sëmundjes në bërthamat e qelizave epiteliale.Kohët e fundit është propozuar përdorimi i ELISA, RZNGA dhe PCR. për të treguar antigjene specifike virale.Sezoni i epidemisë 2017-2018 është në rrugë e sipër. Vaksinuesit përgatisin shiringa, terapistët përgatisin fonendoskopë, farmacistët grumbullojnë "ilaçe kundër gripit" dhe popullata lexon raportet e mediave dhe shpreson të mbijetojë një sulm tjetër viral sezonal me humbje minimale. Me kalimin e viteve të zhvillimit aktiv të hapësirës së informacionit, qytetarët tashmë janë mësuar me emrat misterioz H1N1 ose H5N1, dhe disa tashmë e dinë se i pari është gripi i derrit, dhe i dyti është gripi i shpendëve. Por deri më tani, pak pacientë të zakonshëm - ish dhe të ardhshëm - e kuptojnë se si funksionon virusi i gripit dhe si funksionon saktësisht. MedAboutMe do ta plotësojë këtë boshllëk.
Si organizohet virusi i gripit?
Viruset e influencës i përkasin një familjeje të veçantë ortomiksovirusesh. Gjenomi i tyre nuk përmban ADN me dy fije, si te njerëzit, por ARN me një zinxhir. Për më tepër, ky zinxhir përbëhet nga 8 fragmente të veçanta që kodojnë në përgjithësi vetëm 11 proteina. Fragmentet e ARN-së madje replikohen, domethënë shumohen në mënyrë të pavarur nga njëra-tjetra. Kjo është një pikë e rëndësishme që shpjegon pse viruset e gripit ndryshojnë dhe formojnë varietete të reja kaq lehtë. Nëse dy shtame të ndryshme të virusit të influencës depërtojnë në një qelizë, atëherë ato mund të shkëmbejnë seksione të veçanta të gjenomit, duke krijuar kështu viruse të reja, që nuk ekzistonin më parë.
Forma e virusit është një sferë. Në zemër të kësaj sfere janë fragmente të një vargu ARN, secila prej të cilave shoqërohet me një grup proteinash përgjegjëse për riprodhimin e këtij fragmenti të veçantë të gjenomit, domethënë ato përfaqësojnë 8 nukleoproteina. Të gjitha këto nukleoproteina janë të paketuara në një nukleokapsid, një guaskë proteine e vidhosur në mënyrë delikate. Dhe në krye - dhe kjo është një veçori e veçantë e të ashtuquajturve viruse të mbështjellë - ka një shtresë tjetër, e cila quhet superkapsid.
Superkapsidi është një formacion jashtëzakonisht i rëndësishëm për virusin e gripit. Në fakt, kjo është një membranë e dyfishtë lipidike, e cila përfshin disa lloje glikoproteinash - komplekse proteinash dhe karbohidratesh. Është nga glikoproteinat që shkencëtarët përcaktojnë se çfarë lloji i virusit të gripit hyri në epruvetën e tyre. Është falë këtyre përbërjeve që virusi hyn në qelizë dhe shumohet. Dhe, së fundi, disa ilaçe efektive kundër gripit synojnë kontaktin me glikoproteinat.
Cilat komponime unike mund të gjenden në sipërfaqen e superkapsidit të virusit të influencës?
- Hemaglutinina.
Ky është një përbërës me të cilin virusi, së pari, njeh receptorët e qelizave të organizmit pritës dhe së dyti, u ngjitet atyre. Antitrupat ndaj hemagglutininës formohen kur një person sëmuret me një lloj të caktuar të virusit të gripit dhe siguron mbrojtje në të ardhmen kundër tij. Ekzistojnë 16 nëntipe të hemaglutininës.
- Neuraminidaza.
Kjo është një enzimë që, së pari, shkatërron përbërësit e shtresës mbrojtëse të mukusit në mukozën e traktit respirator dhe në këtë mënyrë lehtëson kalimin e virusit në qelizën e synuar. Së dyti, neuraminidaza është e përfshirë në shkrirjen e grimcave virale me qelizën. Së fundi, siguron lirimin e grimcave të reja virale nga qeliza e infektuar. Nëse nuk do të kishte neuraminidazë, atëherë cikli i riprodhimit do të kufizohej vetëm në një qelizë, edhe pa asnjë simptomë të sëmundjes. Antitrupat ndaj neuraminidazës formohen në trupin tonë si rezultat i vaksinimit - ato nuk lejojnë që virusi i gripit të përhapet në të gjithë trupin. Ekzistojnë 9 nëntipe të neuraminidazës në viruset e influencës A dhe nga një në viruset e influencës B dhe C.
- Proteina M2.
Ky është i ashtuquajturi kanal jonik, domethënë një "vrimë" e rregullueshme në membranën e virusit përmes së cilës mund të lëvizin jonet. Meqenëse po flasim për jone, do të thotë se flasim për ngarkesat që ato mbartin, domethënë kur kanali jonik funksionon, pH brenda grimcave virale do të ndryshojë. Proteina M2 është menduar për transferimin e protoneve, domethënë bërthamave të atomit të hidrogjenit që kanë një ngarkesë pozitive (H +).
Pra, virusi i influencës, me ndihmën e neuraminidazës, kaloi nëpër shtresën e mukusit në traktin respirator dhe arriti në sipërfaqen e qelizës epiteliale, më saktë, në epitelin ciliar që mbulon ato. Neuraminidaza ka një "xhep" të veçantë me të cilin lidhet me mbetjet e vogla të karbohidrateve që dalin nga membrana qelizore (oligosakaride). Në këtë rast, superkapsidi i virusit bie në kontakt me membranën qelizore dhe shtresat e tyre lipidike bashkohen. Si rezultat, nukleokapsidi, që përmban, siç kujtojmë, 8 segmente të ARN-së, hyn në qelizë, në citoplazmën e saj.
Ndërsa procesi i depërtimit të nukleokapsidit të virusit në qelizë është duke u zhvilluar, proteina M2 po funksionon në mënyrë aktive. Ai pompon protone në virus, që do të thotë se mjedisi brenda tij bëhet gjithnjë e më acid. Si rezultat i këtyre manipulimeve, përmbajtja e nukleokapsidit depërton në bërthamën e qelizës. Në të njëjtën kohë, segmentet e ARN-së virale lëshohen në formën e komplekseve me proteina, të cilat marrin të gjitha burimet e nevojshme të qelizës në dispozicion dhe fillojnë prodhimin e viruseve të reja. Ky është gjithashtu një proces shumë i zhytur në mendime, gjatë të cilit formohen mRNA "të përkohshme", duke lënë bërthamën për citoplazmën për të organizuar sintezën e proteinave virale atje. Më pas këto proteina transportohen në bërthamë, ku, më në fund, bëhet grumbullimi i grimcave virale. Një pjesë e ARN-së së re gjenomike përdoret për replikim shtesë të gjenomit të virusit.
Mund të admirohet vetëm saktësia e grumbullimit të 8 segmenteve të ndryshme të ARN-së virale në një grimcë virale të ardhshme. Është e pamundur që dy segmente identike të hyjnë në të njëjtin nukleokapsid dhe mekanizmi i këtij procesi është ende i panjohur. Në këtë moment, thjesht mund të ndodhë formimi i viruseve reassortant, të cilat diskutuam më lart. Së fundi, nukleokapsidet e përfunduara lëvizin në citoplazmë. Kur kalon nëpër membranën qelizore, nukleokapsidi i sapomontuar merr një guaskë superkapside me të gjithë grupin e glikoproteinave.
I gjithë cikli nga depërtimi i virusit në qelizë deri në lëshimin e grimcave të reja virale prej tij zgjat nga 6 deri në 8 orë. Viruse të shumta dalin dhe infektojnë qelizat fqinje. Më rrallë, virionet hyjnë në qarkullimin e gjakut dhe përhapen në të gjithë trupin. Përhapja e virusit përmes indeve dhe organeve quhet viremia. Kulmi i replikimit të virusit të influencës vërehet në intervalin nga 24 deri në 72 orë nga momenti kur grimcat virale hyjnë në epitelin e traktit respirator.
Kur lirohen virionet e reja, qelizat në të cilat ata riprodhohen vdesin. Procesi inflamator shpërthen. Prandaj, me gripin, trakti i sipërm i frymëmarrjes preket kryesisht, gradualisht inflamacioni mbulon trake dhe bronke. Nëse viruset hyjnë në qarkullimin e gjakut dhe përhapen në të gjithë trupin, infeksioni bëhet i përgjithësuar, zhvillohet dehja e trupit.
Rreziku i gripit qëndron në faktin se ai prek enët e gjakut dhe sistemin nervor. Në sfondin e infeksionit me virusin e gripit, ekziston një formim masiv i specieve reaktive të oksigjenit (ROS), domethënë radikalëve të lirë që tentojnë të oksidojnë gjithçka që u del në rrugën e tyre.
Duhet të kuptohet se vetë virusi i gripit nuk përmban toksina. Efekti toksik ushtrohet nga komponimet që trupi ynë prodhon në përpjekje për t'u mbrojtur nga virusi. Ky reagim është aq i dhunshëm dhe vendi për futjen e virusit është zgjedhur me aq “sukses” saqë një person vuan nga sistemi i tij imunitar. Sipas hulumtimit, ROS nxisin proceset e proteolizës - shkatërrimin e proteinave. Kjo ndodh në rrugët e frymëmarrjes në kufi me ajrin, duke rezultuar në një shpërthim "frymëmarrjeje" ose "metabolike".
Meqenëse procesi i futjes dhe riprodhimit të virusit zhvillohet në traktin respirator, muret e kapilarëve të vendosur atje (enët e vogla të gjakut) vuajnë para së gjithash. Ato bëhen më të brishta, të depërtueshme, gjë që në raste të rënda çon në ndërprerje të qarkullimit lokal, zhvillimin e sindromës hemorragjike dhe kërcënimin e edemës pulmonare. Në sfondin e dëmtimit të sistemit vaskular, furnizimi me gjak në tru mund të përkeqësohet dhe, si rezultat, formohet një sindromë neurotoksike.
Sistemi imunitar në këtë kohë aktivizon prodhimin e një sasie të madhe citokinash - substanca që shkaktojnë reaksione inflamatore dhe kanë një efekt citotoksik. Normalisht, ata duhet të angazhohen në inaktivizimin dhe eliminimin e agjentëve infektivë. Por shkalla e procesit është aq e madhe sa që zhvillohet një përgjigje sistemike inflamatore.
Si rezultat, për shkak të dëmtimit të mukozës së traktit respirator dhe enëve të gjakut, aftësia e sistemit imunitar për t'i bërë ballë kërcënimeve të jashtme zvogëlohet, dhe aktiviteti i qelizave mbrojtëse të gjakut të neutrofileve zvogëlohet. Në përgjithësi, kjo çon në aktivizimin e sëmundjeve kronike ekzistuese dhe rrit rrezikun e infeksionit bakterial. Komplikacioni më i rëndë dhe më i zakonshëm i gripit është pneumonia.
Llojet e ndryshme të gripit ndryshojnë nga njëri-tjetri, në veçanti, aftësia për të aktivizuar prodhimin masiv të ROS. Prandaj, disa lloje të gripit janë më të rënda, ndërsa të tjerat janë më të lehta. Në një masë të madhe, gjendja e trupit të pacientit, statusi i tij imunitar, përvoja e njohjes me shtame të tjera luajnë një rol. Disa lloje të gripit janë më të rrezikshëm për të moshuarit dhe fëmijët, ndërsa të tjerët më shpesh prekin popullatën në kulmin e tyre.
Për të ndaluar procesin e riprodhimit të virusit në qeliza dhe përhapjen e tij në të gjithë trupin, nevojiten substanca që mund të ndërpresin ciklin e riprodhimit të tij, të mprehur nga evolucioni.
Në vitin 1961, shkencëtarët propozuan të luftonin viruset e gripit me amantadinë. Ky përbërës u miratua për përdorim në 1966, dhe në 1993 u shfaq rimantadina, analoge e saj. Amantadina (dhe rimantadina) janë në gjendje të bllokojnë kanalet jonike të proteinës M2. Kjo ndalon riprodhimin e virusit në fazat fillestare.
Ilaçi ishte shumë efektiv kundër viruseve të grupit A, por nuk kishte efekt në viruset e grupit B dhe C. Dhe në vitin 2006, Qendrat për Kontrollin dhe Parandalimin e Sëmundjeve (CDC) publikuan të dhëna për rezistencën (rezistencën) jashtëzakonisht të lartë të disa shtameve të virusit. tek adamantanet, duke arritur deri në 90%. Shkaku ishin mutacionet pikësore në gjenomën e virusit që ndodhën gjatë trajtimit me adamantane. Pra, sot, rimantadina dhe analogët e tjerë të saj konsiderohen si barna joefektive. Për më tepër, ato fillimisht ishin të padobishme kundër viruseve të grupeve B dhe C.
Në vitin 1983, u zhvilluan frenuesit e neuraminidazës - substanca që bllokojnë aftësinë e enzimës për të shkaktuar lirimin e virioneve të reja nga një qelizë e infektuar. Kjo ju lejon të ndaloni riprodhimin dhe përhapjen e virusit.
Frenuesit e neuraminidazës përfshijnë oseltamivir (Tamiflu) dhe zanamivir (Relenza). Që nga viti 2009, një tjetër ilaç intravenoz nga ky grup, paramivir, është miratuar për përdorim në Shtetet e Bashkuara. Këto barna janë, në fakt, të vetmet medikamente të krijuara posaçërisht për të luftuar virusin e gripit. Por ato duhet të merren brenda 24-48 orëve nga momenti i shfaqjes së parë të sëmundjes. Më vonë ato do të jenë joefektive - viruse të shumta të reja tashmë do të përhapen në të gjithë trupin.
Të gjithë agjentët e tjerë të ashtuquajtur antiviralë nuk kanë asnjë efekt në vetë virusin e gripit ose në fazat individuale të depërtimit të tij në trup, riprodhimit dhe përhapjes.
- Virusi i gripit është një konstrukt i krijuar nga natyra për të depërtuar në trup përmes rrugëve të frymëmarrjes dhe i pajisur me të gjithë "çelësat kryesorë" të nevojshëm për këtë.
- Ekzistojnë vetëm disa lloje të barnave që veprojnë në mënyrë specifike mbi virusin e gripit, duke marrë parasysh karakteristikat e ciklit jetësor dhe strukturës së tij. Por një nga këto barna tashmë është joefektive, pasi virusi është përshtatur me të. Dhe llojet e tjera të barnave janë efektive vetëm për një periudhë shumë të shkurtër pas shfaqjes së simptomave të para. Efekti anti-grip i barnave të tjera nuk është vërtetuar.
- Prandaj, për trajtimin e gripit përdoret terapi simptomatike dhe monitorimi i gjendjes së pacientit. Në shumicën e rasteve, me grip, mjafton thjesht të shtriheni në shtëpi, duke marrë ilaçe për të ulur temperaturën e lartë nëse ajo është rritur në 39 ° C dhe mjete të tjera për të lehtësuar gjendjen e pacientit. Është e rëndësishme të parandaloni zhvillimin e komplikimeve - për këtë ju vetëm duhet të krijoni të gjitha kushtet që trupi të luftojë virusin.
- Vaksinimi mbetet mënyra më e mirë për të luftuar virusin. Edhe nëse një person është vaksinuar kundër një lloji dhe ka marrë një tjetër, antitrupat ekzistues mund të ofrojnë të paktën mbrojtje minimale dhe të lehtësojnë rrjedhën e sëmundjes.
Shkarkoni aplikacionin kundër gripit dhe vaksinimit
K. SCHOLTISSEK dhe H.-D. KLENK (CH. SCHOLTISSEK, H.-D. KLENK)
I. PARAQITJE
Ekzistojnë një numër rishikimesh mbi problemin e riprodhimit të virusit të gripit. Literatura para vitit 1968 është përmbledhur në Hoyle (1968) dhe Scholtissek (1969); rishikimet më të fundit janë White (1973) dhe Compans dhe Choppin (1974).
Shumica e të dhënave për replikimin janë marrë nga studimi i virusit të gripit të tipit A. Ndryshime domethënëse në (Mekanizmat e replikimit të llojeve të tjera të virusit të influencës nuk janë gjetur ende.
Disa sisteme kulturash qelizore të përshtatshme për studimin e replikimit janë përhapur, si përhapja e llojit WSN të virusit të influencës në qelizat MDBK (Choppin, 1969) ose përhapja e virusit të sëmundjes së shpendëve (FPV) në qelizat fibroblaste të embrionit të pulës. Një shembull i kurbës së rritjes së virusit të fundit në një cikël të vetëm është vërtetuar në 30, ku periudha e vonesës është afërsisht 3 orë dhe prodhimi i virusit arrin një pllajë midis 8 dhe 12 orësh. Prandaj, sisteme të tilla janë shumë të përshtatshme për studime biokimike.
II. ADORBIMI, DEPERTIMI, "SHRISHJA" E VIRUSIT
Infeksioni i një qelize me një virus fillon me adsorbimin, d.m.th., ngjitjen e një grimce virale në sipërfaqen e qelizës. Lidhja kërkon dy struktura plotësuese, domethënë: vendet e receptorit në sipërfaqen e qelizës dhe një komponent viral përgjegjës për njohjen e këtyre vendeve të receptorit. Aftësia e virusit të influencës për të ndërvepruar me eritrocite me origjinë të ndryshme dhe për t'i aglutinuar ato është e njohur për shumë vite (Hirst, 1941; McClelland, Hare, 1941.) Hemaglutinimi është përdorur si një model për ndërveprimin e virusit të influencës me një sipërfaqe qelizore dhe "shumica e njohurive tuaja për këtë fenomen vijnë nga studime të tilla. Sidoqoftë, duhet pasur shumë kujdes në përgjithësime, pasi strukturat e sipërfaqes së eritrociteve dhe sipërfaqet e qelizave të infektuara mund të jenë krejtësisht të ndryshme (shih gjithashtu Kapitullin 3).
A. ROLI I HEMAGLUTININËS NË ADORBIM
Komponenti i virionit i përfshirë në lidhje është thumba HA*. Roli i β-proteinave virale në fillimin e infeksionit është studiuar duke përdorur antitrupa specifikë për dy proteina sipërfaqësore: HA* dhe NA*. Këto antitrupa mund të merren duke përdorur viruse rekombinante. Për shembull, kryqëzimi midis viruseve AO dhe A2 rezulton në formimin e rikombinantit X7F1, i cili mbart HA*, AO dhe NA* A2 (Kilbourne et al., 1968). Antiserumi kundër virusit X7F1 nuk frenon NA* të viruseve të gripit të tipit AO, por frenon hemaglutinimin dhe neutralizon infektivitetin e këtij lloji virusesh. Ndërveprimi i të njëjtit serum me viruset e influencës A2 nuk frenon hemaglutinimin ose infektivitetin, megjithëse neutralizimi i aktivitetit NA* është i plotë. Kështu, NA* nuk përfshihet në procesin e inicimit të infeksionit dhe vetëm NA* duket se është përgjegjëse për adsorbimin. Ky koncept mbështetet nga provat se grimcat virale nga të cilat u hoqën vetëm pikat e neuraminidazës nga enzimat proteolitike mbetën infektive (Schulze, 1970).
Ka të dhëna se pjesa hemaglutinuese është e lokalizuar në pjesën e jashtme të "spikut" të HA*, e pasur me karbohidrate (shih kapitullin 3). Karbohidratet duket se janë thelbësore për funksionimin e HA*, pasi proteinat HA* jo të glikoziluara nuk janë në gjendje të lidhen me eritrocitet (Klenk et al., 1972b).
B. RECEPTOR I VIRUSIT TË GRIPIT
Karbohidratet janë një përbërës thelbësor (përbërës jo vetëm i hemagglutishin, por edhe i receptorit viral në sipërfaqen e qelizës. Hirst (1942) vuri re se kompleksi virus-eritrocit është i paqëndrueshëm dhe se receptori në sipërfaqen e qelizës shkatërrohet nga enzima e virus Siç u tregua më vonë, kjo enzimë është neuraminidaza, e cila shkëput acidin neuraskik nga glikoproteinat (Klenk et al., 1955; Klenk, Stoffel, 1956; Gottschalk, 1957). Ky ishte demonstrimi i parë i një enzime që është pjesë përbërëse i një grimce virale., 1947. Kështu, u zbulua se receptori për virusin e influencës është një glikoproteinë që përmban acid neuraminik.
Që atëherë, janë grumbulluar shumë informacione
rreth receptorit myxovirus, i përmbledhur së fundi në një përmbledhje
Hughes (1973). Shkurtimisht, të dhënat e marra reduktohen në vijim
duke fryrë. Vendet e receptorit përmbajnë mbetje të neuromio-
acidi joik, të cilët janë të pranishëm në zinxhirët e karbohidrateve
glikoproteinat. Mbetjet terminale jooksiduese të neuromave
noznla janë të nevojshme për ndërveprimin e glikoproteinave me vi
virusi i gripit. Trajtimi me neuraminidazë eliminon plotësisht
veprimtari detyruese. Studimet e degradimit me
duke përdorur periodat sugjerojnë që për lidhjen
aktiviteti kërkon një molekulë neuraminike të paprekur
acidet (Suttajit dhe Winzler, 1971). grupi karboksil,
ndoshta gjithashtu luan një rol të rëndësishëm, pasi është e nevojshme,
me sa duket edhe forcat elektrostatike (Huang, 1974).
Duket e mundshme që ka vetëm një të veçantë të dobët
veçori në lidhje me strukturën me të cilën lidhet
acidi neuraminik, pasi, siç është treguar, i tëri
një grup glikoproteinash që përmbajnë acid yairamik,
të lidhura me myxoviruset. Për më tepër, gangliozidet (gli-
janë aktive në këtë drejtim (Haywood, 1975).
Duhet të shpresojmë që çështja e lidhjes së virusit të gripit do të bëhet më e qartë pasi të jetë vendosur struktura molekulare e receptorit. Në një farë mase, kjo tashmë është arritur në rastin e eritrociteve (Marchesi et al., 1973). Informacion shtesë mund të sigurohet gjithashtu nga studimi i lidhjes së myxoviruseve në membranat artificiale (Tiffany dhe Bough, 1971).
C. MEKANIZMAT E MUNDSHME TË DEPERTIMIT DHE "SHQIPTIMIT"
Janë propozuar dy "mekanizma të ndryshëm për depërtimin dhe "zhveshjen" jo vetëm të virusit të gripit, por edhe të viruseve në përgjithësi. Të dyja pikëpamjet bazohen kryesisht në studimet në mikroskop elektronik. Një nga këta mekanizma është vironexis, i cili besohet se është një proces i ppnocitozës kur grimcat virale përfshihen në pinozome, të cilat më pas bashkohen me lizozomet, dhe enzimat e lizozomeve bëjnë që virusi të "zhveshet" (Fazekas de St. Grot, 1948) Konfirmimi mikroskopik elektronik i kësaj pike të Pamja u mor në veprat e Dales dhe Choppin (1962) dhe Dourmashkin dhe Tyrrell (1970) Në 10 minuta pas infektimit, grimcat virale u panë në kontakt të drejtpërdrejtë me sipërfaqen e qelizës, dhe pas 20 minutash grimcat u gjetën brenda vakuolave citoplazmike. Ndryshe nga ky studim, Morgan dhe Rose (1968) sugjerojnë se hyrja mund të jetë për shkak të shkrirjes së mbështjellësit viral me membranën qelizore bujtëse. Kështu, aktualisht nuk ka konsensus në lidhje me mekanizmin e depërtimit të virusit të gripit.
Siç përshkruhet në kap. 5, virionet e virusit të influencës përmbajnë një polimerazë ARN të lidhur me komponentët e tyre të ribonukleoproteinës. Prandaj, nuk ka gjasa që procesi i "zhveshjes" të jetë i shkëputur në hapësirë nga procesi i çlirimit të ribonukleolroteinës. Dhe kjo fazë ndodh në sipërfaqen e qelizës, sipas mekanizmit. e shkrirjes së membranës dhe në vezikulat fagocitare, sipas mekanizmit të viroheksis.
III. TRANSKRIPIMI A. SEKUENCA E SINTEZËS SË ARN-së
Pas “zhveshjes” sARN-ja e virionit duhet transkriptuar në ARN plotësuese.ARN polimeraza e futur me grimcën infektuese duhet të funksionojë në fazën e parë të riprodhimit të virusit (shih Kapitullin 5). Gjenomi i virusit të influencës mund të izolohet nga virionet vetëm në formë
fragmente individuale (shih kap. 6). Për më tepër, ai funksionon në formën e - fragmenteve të veçanta, siç u tregua nga analiza gjenetike (om. Kap. 7) dhe inaktivizimi hap pas hapi i virusit infektiv (Scholtissek, Rott, 1964). Në këtë drejtim, duhet të supozohet se - polimeraza fillon sintezën e ARN-së në çdo fragment individual Meqenëse ARN nuk ekziston në qelizë si një molekulë e lirë, por është gjithmonë e veshur me një proteinë, lind pyetja: me cilën proteinë lidhet ARN virale gjatë replikimit të saj?
Eksperimentet e kryera mbi sintezën e ARN-së së virusit të influencës paraqesin vështirësi të mëdha, pasi aktinomycina D nuk mund të përdoret për të zbuluar prodhimin e ARN-së virale me frenim specifik të sintezës së ARN-së qelizore, pasi ky antibiotik pengon riprodhimin e virusit të influencës (Barry et al., 1962; Rott dhe Scholtissek, 1964; Barry et al., 1965; Pons, 1967). Për këtë arsye, për të përcaktuar sekuencën e sintezës së ARN-së me kalimin e kohës, u përdor hibridizimi specifik i ARN-së së etiketuar me puls në pika të ndryshme pas infeksionit me një tepricë të vARN-së së paetiketuar ose scARN-së e ndjekur nga trajtimi me RNase (Scholtissek dhe Rott, 1970). Në fazat e hershme të ciklit infektiv, mbizotëronte sinteza e eARN-së, e cila arriti maksimum rreth 2 orë pas infektimit, ndërsa në fazat e mëvonshme pjesa më e madhe e ARN-së specifike për virusin e prodhuar ishte vARN. Krug (1972), duke përdorur një metodë tjetër, tregoi gjithashtu se 4 orë pas infektimit, sinteza e BIKPHK pothuajse ndalon plotësisht. Pas ekstraktimit me fenol, gjendet një sasi relativisht e vogël lncARN (Scholtissek dhe Rott, 1970).
Për faktin se një ose një lloj tjetër i ARN virale ka informacion1!! funksionon dhe përdoret si shabllon për sintezën e proteinave virale (shih seksionin IVA), mund të ketë njëfarë kontrolli përkthimor në nivelin e katabolizmit diferencial të ARN-së virale. Prandaj, u kryen eksperimente të ndjekjes së pulsit për të studiuar stabilitetin e ARN të virusit të influencës in vivo. Është zbuluar se, ndryshe nga ARN-ja qelizore, të dy llojet e ARN-së virale janë plotësisht të qëndrueshme gjatë periudhës 90-minutëshe të chenzës (Scholtissek et al., 1972).
Më parë, gjatë studimit të sintezës së ARN-së virale in vivo, kur aktinomicina D u shtua në fazat e fundit të ciklit infektiv (Duesberg dhe Robinson, 1967; Nayak, 1970; Ma-hy, 1970), nuk u mor parasysh se antibiotiku frenon në mënyrë specifike sintezën e ARN plotësuese in vivo (Scholtissek dhe Rott, 1970; Pons, 1973). Meqenëse ARN-ja lnc është e izoluar nga qelizat e infektuara si të paktën pesë fragmente të veçanta, u arrit në përfundimin se ARN virale sintetizohet gjithashtu si fragmente (Pons dhe Hirst, 1968).
B. LOKALIZIMI I SINTEZËS SË ARN-së VIRALE BRENDA QELIZËS BRITËSI
Nga të dhënat e marra nga autoradiografia, u arrit në përfundimin se vendi i sintezës së ARN-së virale është, me sa duket, bërthamat qelizore (Scholtissek et al., 1962; Barry et al., 1974). Meqenëse periudhat e pulsit të përdorura në këto studime ishin ende shumë të gjata, nuk mund të përjashtohet që ARN virale të sintetizohet në citoplazmën e qelizës dhe më pas të transportohet në bërthamat ku mund të grumbullohet. Përveç kësaj, vRNA dhe scARN mund të sintetizohen në një qelizë në vende të ndryshme.
C. INHIBIMI I SINTEZËS SË ARN-së virale 1. Aktimomicina D, Mitramicina dhe α-amanitina
Kur aktinomicina D ose mitramicina, të cilat ndërhyjnë në funksionin e shabllonit të ADN-së, u shtohen qelizave të infektuara në një kohë kur ARN iopolimeraza e varur nga ARN virale është tashmë e pranishme (për shembull, 2 orë pas infektimit), vARN vazhdon të sintetizohet për rreth 2 orë. më shumë, megjithatë, prodhimi i scRNA ndalon menjëherë. Më vonë, sinteza e vARN gjithashtu zvogëlohet, duke treguar se ajo kërkon prodhim të vazhdueshëm të scARN (Rott et al., 1965; Scholtissek dhe Rott, 1970; Scholtissek et al., 1970; Pons, 1973). Gregoriades (1970) tregoi se aktinomicina D gjithashtu ka një efekt të fortë në sintezën e vRNA kur shtohet vonë në ciklin infektiv. Në këto eksperimente, sinteza e ARN-së virale u përcaktua nga rritja e inkorporimit të uridinës së etiketuar në ARN-në totale të qelizave të infektuara. Kjo rritje mund të eliminohet me shtimin e aktinomicinës D. Megjithatë, duhet mbajtur parasysh se infeksioni i virusit të influencës shkakton një rritje në inkorporimin e uridinës së etiketuar në qelizë pas infeksionit (Scholtissek et al., 1967) dhe se aktinomycina D ka një efekt frenues në këtë inkorporim (Scholtissek et al., 1969). siAmanitin, i cili nuk ka afinitet për ADN-në, ndikon në aktivitetin e njërës prej polimerazave qelizore të ARN-së (ARN podimeraza II), gjithashtu pengon sintezën e escARN-së kur shtohet në lëngun e kulturës menjëherë pas infektimit (Rott dhe Scholtissek, 1970; Mahy et al. ., 1972).
Mekanizmi me të cilin këta antibiotikë frenojnë në mënyrë specifike sintezën e ssARN-së nuk është plotësisht i kuptuar, pasi ata nuk ndërhyjnë në formimin e ssARN-së in vitro. Kështu, këta antibiotikë veprojnë vetëm in vivo, megjithëse enzima sintetizuese e ssARN-së mund të izolohet nga qelizat që arrijnë pas 2 h pas infektimit, u shtua aktinomycin D (Scholtissek dhe Rott, 1969a).
Riprodhimi i "viruseve të influencës gjithashtu mund të shtypet nga veprime të tjera në ADN-në e qelizës pritëse - futja e mitomcinës C, trajtimi paraprak me rrezatim ultravjollcë ose heqja e bërthamave qelizore përpara infektimit (Barry, 1964; Rott et al., 1965; Nayak , Rasmussen, 1966; Fol-.lett et al., 1974; Kelly et al., 1974). Mekanizmi me të cilin këto efekte ndikojnë në riprodhimin e virusit të gripit mund "të jetë i njëjtë me atë të antibiotikëve të tjerë. I vetmi sugjerim" që mund të bëhet nga këto studime është se ekziston nevoja për bërthama qelizore aktive "funksionale" dhe (ose) në funksioni i varur nga ADN-ja i qelizës për riprodhimin e viruseve të gripit. Është e pamundur të thuhet se cilat janë këto funksione.
2. Cikloheksimidi
Kur shtohet cikloheksimidi, i cili frenon në mënyrë specifike sintezën e proteinave në qelizat shtazore, 2 orë pas infektimit me virusin e influencës, formimi i vARN ndalon menjëherë, ndërsa formimi i vzhARN vazhdon ende për të paktën 2 orë (Scholtissek dhe Rott, 1970; Pons, 1973). Nuk dihet ende nëse sinteza e vazhdueshme e një proteine virale ose "qelizore" e përdorur si "Cilësi/kofaktor për polimerazën që sintetizon vARN" është e nevojshme ose nëse disa "proteina (për shembull, proteina NP) është e nevojshme për të stabilizuar vARN e sapo sintetizuar, ose shtypja e sintezës së një proteine të caktuar virale çon në formimin e vazhdueshëm të ecRNA, sinteza e së cilës normalisht fiket 3 orë pas infektimit. Ky mbyllje mund të jetë i nevojshëm për të shkaktuar sintezën e vARN-së. Studimet me mutantë të ndjeshëm ndaj temperaturës duhet t'u përgjigjen disa prej këtyre pyetjeve.
Eksperimentet nga Bean dhe Simpson (1973) treguan se transkriptimi primar in vivo (sinteza e ecRNA në shabllonin e mRNA duke përdorur polimerazën e grimcës infektuese) nuk shtypet nga cikloheksimidi, ndërsa aktinomicina D e shtyp plotësisht transkriptimin. Kështu, cikloheksimidi nuk ndikon in vivo në aktivitetin e polimerazës së futur me grimcën infektuese dhe sintetizuese të eARN-së, por frenon sintezën e një polimeraze të re të nevojshme për prodhimin e ecRNA.
3. Glukozamina
Glukozamina dihet se e varfëron grupin e UTP në qelizat e embrionit të pulës duke gjeneruar UTP-]M-acetilglukozamine (Scholtissek, 1971). Kur tretësira Earle që përmban glukozë përdoret si një mjedis kulture, ajo
ndikon vetëm në sintezën e glikoproteinave virale (shih seksionin V). Nëse, sidoqoftë, glukoza si burim energjie zëvendësohet nga liruvati ose fukoza, atëherë shterimi i grupit të UTP nga këto aminosheqerna ndodh afërsisht 10 herë më aktivisht. Në këto kushte, grupi UTP i qelizës pritëse bëhet një kufizues specifik në shpejtësinë e sintezës së vARN-së, ndërkohë që sinteza e (ARN qelizore) nuk është prekur ende (Scholtissek, 1975). Si rezultat i shtypjes së sintezës së ARN-së virale , formimi i proteinave virale gjithashtu mungon.
Këto të dhëna mund të interpretohen në dy mënyra: ose ARN polimeraza e varur nga ARN virale ka një afinitet të ulët për UTP në krahasim me polimerazat e varura nga ADN-ja qelizore dhe RIC, ose ka dy grupe pak a shumë të pavarura të UTP në qelizë, një. prej të cilave "mund të përdoret për sintezën e ARN-së virale dhe ndikohet më shumë nga glukozamina sesa grupi tjetër, i cili mund të përdoret si substrat nga ARN polimerazat.
D. SINTEZA E ARN VIRALE IN VITRO
Në qelizat e infektuara me virusin e gripit, disa studiues kanë gjetur ARN polimerazë të varur nga ARN (Ho, Walters, 1966; Scholtissek, Rott, 1969a; Skehel, Burke, 1969; Ruck et al., 1969; Mahy, Bromley, 1970; Compans , Caliguiri, 1973). Pjesa më e madhe e aktivitetit të enzimës gjendet në fraksionin mikrozomal të qelizave të infektuara. Në sistemin in vitro, ky aktivitet hiqet nga RNase, por jo nga DNase. Kjo do të thotë se shablloni i brendshëm është ARN.Reaksioni kërkon praninë e të katër trifosfateve nukleozide dhe është i ndjeshëm ndaj aktinom-icinës D. Shumica e prodhimit të reaksionit in vitro ka një peshë molekulare të ulët relative. Të dhënat e Horisberger dhe Guskey (1973) sugjerojnë se dy aktivitete të ndryshme enzimë janë të pranishme në citoplazmë: njëra është e varur nga Mg++ dhe e frenuar nga përqendrimet relativisht të larta të kripës, tjetra është e varur nga Mn++ dhe më rezistente ndaj kripërave. Aktiviteti i fundit i enzimës gjendet gjithashtu brenda grimcave virale (shih Kapitullin 5).
Janë marrë rezultate kontradiktore në lidhje me produktin e enzimës citoplazmike në sistemin in vitro. Ruck ■ et al. (1969) raportuan se në duart e tyre kjo enzimë sintetizon të paktën "disa nga ARN-të e tipit virion (nga 14 në 19S). Autorët arritën në këtë përfundim kur përcaktuan përbërjen bazë të produktit në një sistem in vitro pas inkubimit të fraksioni mikrozomal me të katër trifosfatet nukleozide të etiketuara me radioaktivitet specifik të njohur.
ndaj acidit adenilik të fqinjëve të marrë në të njëjtën punë duke përdorur [(a-32P]ATP) janë në përputhje me të dhënat e analizës së fqinjit më të afërt të marra nga Scholtissek (1969), i cili arriti në përfundimin se produkti në sistemin in vitro ka strukturën e një escRNA Mahy dhe Bromley (1970) në botimin e tyre origjinal deklaruan gjithashtu se një pjesë e produktit në një sistem in vitro të prodhuar nga një enzimë citoplazmike duhet "të jetë një esARN. Megjithatë, kohët e fundit Hastie dhe Mahy (1973) në analizën e fqinjëve të tyre më të afërt dhe hibridizimi specifik konfirmoi prodhimin pothuajse ekskluzivisht të scARN-së nga enzima citoplazmike, siç u tregua për herë të parë nga Scholtissek (1969). më pak se 90% e të cilave ka një sekuencë bazë komplementare me svARN Hastie dhe Mahy (1973) "kanë gjetur se një përqindje e konsiderueshme e produktin në sistem ieme in vitro, i sintetizuar nga një enzimë bërthamore në prani të aktinomicinës D, nuk ishte në gjendje të hibridizohej me vARN të paetiketuar. Nuk është ende e qartë se cili lloj ARN nuk është i aftë për një hibridizimin e tillë. Një pjesë shumë e vogël e ARN-së e sintetizuar në këto kushte hibridizohet me acRNA të paetiketuar (Scholtissek, të dhëna të pabotuara).
Kinetika e përfshirjes së etiketuar të GTP në ARN virale mund të interpretohet si tregues që nuk ka rifillim të sintezës së ARN-së në sistemin in vitro. Nëse preparati i papërpunuar i enzimës inkubohet në përqendrime të ulëta kripe, pothuajse e gjithë ARN e saposintetizuar fillimisht është me një fije floku. Megjithatë, pas nxjerrjes me fenol, "një përqindje e madhe e ARN bëhet rezistente ndaj ARNazës. Fenoli konverton strukturën e ndërmjetme të riprodhimit, të përbërë nga një shabllon me një fije floku dhe scARN të saposintetizuar të mbajtur së bashku në vendin e replikimit nga molekula e polimerazës, në një pjesërisht struktura me dy fije (Feix et al., 1967; Oberg dhe Philipson, 1971). Këto të dhëna për produktin e enzimës së virusit të influencës në sistemin in vitro mund të interpretohen në atë mënyrë që polimeraza jo vetëm që fillon dhe vazhdon polimerizimin, por ndan zinxhirin e saposintetizuar nga shablloni i saj. Përndryshe, formohet një strukturë ARN me dy zinxhirë, e cila nuk ka "funksione biologjike" (Paffenholz, Scholtissek, 1973). ).
Kjo veti e ARN polimerazës së virusit të influencës për të sintetizuar ekskluzivisht scARN në një sistem in vitro është përdorur.
I thirrur për të vendosur lidhjen gjenetike të shtameve të ndryshme të virusit të influencës duke përcaktuar homologjinë në sekuencën bazë midis tyre (Scholtissek, Rott, 1969b; Hobson, Scholtissek, 1970; Anschutz et al., 1972).
IV. SINTEZA E PROTEINAVE VIRALE
A. PËRKTHIM IN VITRO
Problemi se cili lloj i ARN-së - qoftë vir jonik apo komplementar - është "informativ për sintezën e proteinave virale, nuk është zgjidhur ende. Janë marrë rezultate kontradiktore në lidhje me llojin e ARN-së specifike për virusin që lidhet me polisomet. Nayak (1970 ) gjendet në rajonin polisomal të gradientit të saharozës, kryesisht vARN, ndërsa Pons (1972) izoloi vetëm scARN nga polisami. Kjo e fundit u konfirmua nga vëzhgimi se pas shtimit 2 orë pas infektimit, aktinomicina D, e cila ndikon në mënyrë preferenciale në sintezën. e scARN (shih seksionin III, B, 1), në polisomet e qelizave të infektuara, ecRNA nuk zbulohet (Pons, 1973).
Duke përdorur "sistemin e sintetizimit të proteinave nga E. coli dhe vRNA e virusit të influencës si shabllon, Siegert et al. (1973) vëzhguan prodhimin e proteinës virale NP në kushte in vitro. Kjo proteinë e etiketuar NP u karakterizua nga metoda e precipitimit me xhel Ouchterlony Në të kundërt, Kingsbury dhe Webster (1973) nuk vëzhguan ndonjë sintezë të proteinave virale nga vRNA duke përdorur një sistem protein-sintetizues që rrjedh nga retikulocitet e lepurit Në të njëjtin sistem, megjithatë, ata gjetën sintezën e proteinës M virale (Vëll. Ch. 2 ) në një shabllon ARN të izoluar nga qelizat e infektuara. Kështu, për momentin është e pamundur t'i përgjigjemi pyetjes nëse vetëm viriope ose vetëm plotësuese, ose disa fragmente ARN të një lloji dhe disa fragmente ARN të një lloji tjetër përdoren si shabllone për sintezën e proteinave Është e vështirë për viruset e gripit të zbatojnë përkufizimin e zinxhirit viral "negativ" ose "pozitiv", siç sugjerohet nga Baltimore (1971).
B. SINTEZA E PROTEINAVE VIRALE IN VIVO
Studimi i sintezës së "proteinave" virale favorizohet nga fakti se në qelizën e infektuar sinteza e polipeptideve qelizore zëvendësohet nga sinteza specifike për virusin. Në qelizat fibroblaste të embrionit të pulës të infektuara me HPV (Joss et al., 1969; Skehel, 1972; Klenk, Rott, 1973) dhe në qelizat BHK 2IF të infektuara me shtamin WSN të virusit të influencës (Lasarowitz et al., 1971), orë pas infektimit, pothuajse
vetëm një proteinë virale (31). Studiuesit disi të mëhershëm vëzhguan sintezën e tre ose katër polipeptideve në marimangat e infektuara (Taylor et al., 1969; Joss et al., 1969; Holland dhe Kiehn, 1970; White et al., 1970). Më pas janë zbuluar polipeptide të tjera (Lazorowitz et al., 1971; Skehel, 1972; Klenk et al., 1972b; Krug dhe Etkind, 1973). Në përgjithësi, të gjitha α-proteinat strukturore u gjetën në qelizat e infektuara: një ose dy proteina P, nënnjësia nukleokapoide NP, proteina e membranës M, glikoproteina e hemaglutininës së paçarë (HA) dhe e çarë (HA1 dhe HA2) dhe nënnjësia NA. .
Përveç proteinave të virionit, janë përshkruar një ose dy proteina jo-strukturore (NS).
Ka dallime të dukshme<в уровнях синтеза отдельных вирусных полипептидов. NP- и NS-полипептиды обычно первыми обнаруживаются в зараженных «летках. Skehel (1973) предположил, что полипептиды Р2, NP и NS, которые первыми обнаруживаются в «клетках, зараженных ВЧП, являются
produktet e fragmenteve të ARN-së të formuara gjatë transkriptimit selektiv nga polimeraza e virionit të tre fragmenteve të gjenomës virale. Kur qelizat u infektuan në prani të ciklohekimidit dhe u shtua etiketa e pulsit pas heqjes së antibiotikut, u gjetën vetëm këto tre polipeptide. Bazuar në këtë, u supozua se molekulat e ARN-së për këto përbërës u formuan me ndihmën e lolimerazës virione të futur në procesin e transkriptimit primar. Nga ora e 4-të deri në 6-të pas infektimit të fibroblasteve të pulës me MPS, niveli i sintezës së proteinës M rritet, ndërsa sinteza e NS-lolileptidit zvogëlohet (Skehel, 1972, 1973). Kështu, nivelet e sintezës së jolipideve mund të kontrollohen individualisht dhe mund të ndryshojnë gjatë ciklit të rritjes.
Përveç ndarjes së polipeptidit HA në HA1 dhe HA2, nuk ka asnjë provë që polipeptidet e influencës specifike për virusin rezultojnë nga ndarja e prekursorëve të mëdhenj (Taylor et al., 1969; Lazarowitz et al., 1971, Skehel, 1972; , Rott, 1973).
Kohët e fundit, është marrë informacion i ri mbi lokalizimin e komponentëve viralë në qelizat e infektuara duke përdorur autoradiografinë (Becht, 1971) ose teknikat e fraksionimit të qelizave dhe elektroforezës së xhelit (Taylor et al., 1969, 1970). Sipas këtyre studimeve, sinteza e të gjitha proteinave virale me sa duket ndodh në citoplazmë. Studimet e mëparshme të lokalizimit të antigjenit nukleoproteinik me anë të imunofluoreshencës janë interpretuar si që tregojnë se sinteza ndodh në bërthamë me lëshimin e mëvonshëm të antigjenit në citoplazmë (Liu, 1955; Breitenfeld dhe Schafer, 1957; Holtermann et al., 11). Megjithatë, është e qartë se imunofluoreshenca përcakton akumulimin e antigjenit dhe jo sintezën e tij (shih seksionin IV, B, 2).
1. ARN polimeraza
Aktiviteti i ARN polimerazës i varur nga virusi specifik mund të zbulohet në qelizat e infektuara me virusin e gripit ndërmjet 13D dhe 3h pas infektimit, në varësi të sistemit qelizor të përdorur (Scholtissek dhe Rott, 1969a; Skechel dhe Burke, 1969; Ruck et al. ., 1969; Mahy dhe Bromley, 1970). Ky është aktiviteti i parë i zbuluar specifik për virusin pas infektimit. Shumica e aktivitetit viral të lolimerazës zbulohet në fraksionin mikrozomal; një pjesë e këtij aktiviteti mbetet në bërthama dhe nuk mund të hiqet prej andej as me larje intensive. Nuk ka dallime thelbësore në kinetikën e manifestimit ose në kofaktorët e kërkuar midis enzimave bërthamore dhe mikrosomale (Scholtissek dhe Rott, 1969a; Mahy et al., 1975).
Pas fraksionimit të mëtejshëm të citoplazmës në një gradient saharozë hap pas hapi me metodën e Caliguiri dhe Tamm (1970), aktiviteti i polimerazës gjendet në membranat e përafërta (Compans dhe Caliguiri, 1973; Klenk et al., 1974a).
Meqenëse aktiviteti i polimerazës virale u gjet në grimcat virale të pastruara (shih Kapitullin 5), lind pyetja me cilën nga "proteinat" virale mund të shoqërohet. I vetmi produkt specifik për virusin i lidhur me aktivitetin e polimerazës ishte antigjeni RNP (proteina NP plus vRNA virale, e përcaktuar nga fiksimi i komplementit). Të gjitha përpjekjet për të hequr ARN-në nga ky kompleks rezultuan në humbje të plotë të aktivitetit të enzimës (Schwarz dhe Scholtissek, 1973). Proteina P u paraqit si një kandidat për rolin e polimerazës virale (Kilbourne et al., 1972). Kur "kompleksi enzimatik i etiketuar in vivo me aminoacide" u izolua nga qelizat e infektuara me virusin e gripit dhe u pastrua me rreth 35 herë, analiza elektroforetike zbuloi fillimisht vetëm Np-whitea në këtë kompleks.< (Compans, Caliguiri, 1973). Впоследствии, однако, при других условиях введения;метки удалось обнаружить и Р-белок (Caliguiri, Compans, 1974). С другой стороны, Klenk и соавт. (1974) обнаружили Р-белок в цитоплазматическом золе, "который не обладает полимеразной активностью (Scholtissek, Rott, 1969a; Skehel, Burke, 1969). Эти наблюдения могут означать, что Р-белок осуществляет свою (Предполагаемую активность ферментов только при связывании с РНП-антигеном.
Nuk ka gjasa që vetë antigjeni RNP të ketë aktivitet polimerazë, pasi serumi hiperimun kundër antigjenit RNP nuk frenon aktivitetin e polimerazës, ndërsa serumi konvaleshent, i cili mund të përmbajë antitrupa ndaj polimerazës, e frenon atë (Scholtissek et al., 1971). Ky serum shërues (i cili u mor nga kafshët që ishin infektuar me viruset e influencës A) frenoi aktivitetin polimerazë të të gjitha shtameve të virusit të influencës A të studiuara, por nuk pengoi aktivitetin e polimerazës së virusit të influencës B. Të gjitha këto vëzhgime janë në përputhje me idenë se antigjeni RNP- (BPHK + NP = = proteina), mund të shërbejë si shabllon për sintezën e eRNA-
2. Proteina nukleokapsidike
Proteina NP lidhet me ARN-në virale, duke formuar antigjenin RNP.Kjo është e vërtetë për proteinën NP të izoluar jo vetëm nga virioni, por edhe nga qeliza e infektuar (Schafer, 1957).
afërsisht 3 orë pas infektimit, një orë para shfaqjes së hemagglutininës (Breitenfeld, Schafer, 1957). Pas kësaj kohe, titri i antigjenit RNP nuk rritet ndjeshëm. Kjo mund të jetë për shkak të ekuilibrit midis sintezës së re dhe përfshirjes në grimcat e pjekura. Sipas etiketës, proteina NP mund të zbulohet në qelizat e infektuara brenda 2 orëve pas infektimit (Scholtissek dhe Rott, 1961; Krug, 1972).
Me ndihmën e antitrupave fluoreshente, antigjeni RNP zbulohet fillimisht në bërthama. Më vonë shfaqet edhe në citoplazmë (Breitenfeld dhe Schafer, 1957). Në kushte të caktuara, si infeksioni abortive (Franklin dhe Brietenfeld, 1959), në prani të p-fluorofenilalaninës (Zimmermann dhe Schafer, 1960), ose në kushtet e fenomenit von Magnus (Rott dhe Scholtissek, 1963), RNP - antigjeni mbetet në bërthama.
Akumulimi i hershëm i antigjenit RNP në bërthamat e qelizave të infektuara nuk do të thotë se proteina NP sintetizohet gjithashtu brenda bërthamave. Studimet autoradiografike, si dhe përdorimi i metodave të fraksionimit të qelizave, tregojnë sintezën citoplazmike të kësaj dhe një proteine tjetër të pasur me argininë dhe transportin e tyre të shpejtë nga citoplazma në bërthama (Taylor et al., 1969, 1970; Becht, 1971).
Në ekstraktet e qelizave të infektuara, një pjesë e caktuar e antigjenit RNP përmban ecRNA (Pons, 1971; Krug, 1972; Krug dhe Etkind, 1973), megjithëse vetëm një lloj ARN gjendet në grimcat virale (që rrjedh nga mungesa e ndonjë vetë-hibridizimi i vARN) (Scholtissek, Rott, 1971; Pons, 1971). Nuk është e mundur të vendoset nëse antigjeni RNP që përmban ecRNA ka një rëndësi specifike në procesin e riprodhimit viral apo është thjesht një artefakt që shfaqet në procesin e fraksionimit të qelizave. Të dy vargjet e ARN-së janë treguar se lidhen në mënyrë të barabartë me proteinën NP in vitro (Scholtissek dhe Becht, 1971). Kështu, nëse ka ndonjë proteinë të lirë NP dhe scARN të lirë, antigjeni përkatës RNP formohet menjëherë gjatë procesit të homogjenizimit. ARN e virionit mund të zhvendoset nga polivina e antigjenit RNP "Ilsulfate O" M (Pons et al., 1969). Prandaj, mund të testohet nëse zëvendësimi i ARN-ve të ndryshme virale në antigjenin RNP në homogjenatet e qelizave është i realizueshëm. Nga ndryshimet në përbërjen e bazave të ARN virale të etiketuara për periudha të ndryshme kohore me 32P dhe të izoluar nga antigjeni RNP citoplazmatik, Krug (1972) arrin në përfundimin se një pjesë e ecARN-së, përpara se të përfshihet në antigjenin RNP, ekziston në një formë e lirë nga NP- ketri. Inkorporimi i 32P në ARN-në e qelizave shtazore ndodh me një fazë të konsiderueshme vonese për shkak të përfshirjes mjaft të ngadaltë të fosforit të etiketuar "in" (pozicioni x i trifosfateve nukleozide (Scholtissek, 1965). Derisa të bëhen rregullimet e duhura për të llogaritur ndryshimet në përbërje
arsyet nuk janë bërë, të dhënat e Krug (1972) duhen interpretuar me kujdes.
Analiza kinetike e Krug (1972) e "shfaqjes së antigjenit RNP në bërthama dhe citoplazmë" sugjeron që antigjeni RNP që grumbullohet në bërthama nuk është një pararendës i antigjenit RNP që gjendet në citoplazmë.
3. Proteinat jo strukturore
Disa proteina jo-strukturore specifike të virusit me funksion të panjohur janë përshkruar për qelizat e infektuara. Njëri prej tyre, me një peshë molekulare relative prej 25,000, i akumuluar në "sasi të mëdha, u emërua NS (Lazarowitz et al., 1971). Në xhel poliakrilamide, ai ka një shkallë migrimi të afërt me atë të proteinës M. Megjithatë, të dyja proteinat, duken të jenë të pavarura nga njëra-tjetra, siç shihet nga ndryshimet në hartat e tyre peptide. "Sasi të mëdha të proteinës NS-" janë gjetur në bërthama (Lazarowitz et al., 1971; Krug, Etkind, 1973). Këto gjetje janë në përputhje me të dhënat e studimeve të mëparshme imunofluoreshente Dimock (1969), i cili vëzhgoi "njollosjen e ndritshme të bërthamave me antiserum specifik për antigjenet virale jo-strukturore, dhe kjo ngjyrosje ndoshta pasqyronte praninë e proteinës NS-". zbuloi se kjo proteinë është gjithashtu proteina kryesore specifike për virusin në fraksionet e ribozomeve të lira dhe të lidhura me membranën, të izoluara nga qelizat e infektuara (Pons, 1972; Compans, 1973; Klenk et al., 1974a). Lidhja e NS me ribozomet duket se varet nga tonazhi (Krug dhe Etkind, 1973). Në tamponët me forcë të ulët jonike, KY nolipaptid - absorbohet në të dy nënnjësitë ribozomale, ndërsa kur u shtua kripë, hiqej prej tyre.
Një studim i kohëve të fundit (Gregoriades, 1973) ngriti disa dyshime në lidhje me identifikimin e NS si një polipeptid jostrukturor i dallueshëm nga polipeptidi virion M. nga qelizat e infektuara të plota, α-bërthamat ose polizomet. Analiza e produkteve të përpunimit triptik të proteinës M, si si dhe B-proteinat e lidhura me bërthamën dhe ribozomet, çuan në shumë rastësi, duke sugjeruar që proteinat M- dhe NS janë identike.Megjithatë, informacione të mëtejshme për të shpjeguar bindshëm këto rezultate.
Përveç NS, mund të ketë përbërës të tjerë jo-strukturorë specifikë për virusin, megjithëse asnjëri prej tyre. nuk është karakterizuar mjaftueshëm. Përdorimi i antiserumit të drejtuar kundër antigjeneve virale jo-strukturore,
Dimmock dhe Watson (1969) precipituan polipeptide të etiketuara në mënyrë radioaktive nga qelizat e infektuara. Analiza elektroforetike në xhel poliakrilamid sugjeroi praninë e disa polipeptideve jo strukturore me përbërësin kryesor që korrespondon me NS. Një nga komponentët e mbetur jo-strukturorë migron më shpejt dhe mund të korrespondojë me komponentin me peshë molekulare relative prej 10,000 deri në 15,000 të përshkruar nga Skehel (1972), Krug dhe Etkind (1973).
4. Proteina M e membranës
Proteina M, e cila "rreshton sipërfaqen e brendshme të shtresës së dyfishtë lipidike të mbështjellësit dhe është e pasur me virion, gjendet në qelizat e infektuara në sasi relativisht të vogla. Kjo sugjeron jo vetëm kontrollueshmërinë e sintezës së M-belmës, por edhe mundësia që kjo sintezë të jetë faza kufizuese e shkallës së riprodhimit të virusit (Lazarowitz et al., 1971) Ky koncept mbështetet nga të dhënat që në një temperaturë prej 29 °C, në të cilën formimi i virusit shtypet, M. -proteina është e vetmja proteinë (virusopedike) që nuk mund të zbulohet në qelizat e infektuara (Klenk, Rott, 1973).
Proteina M (mund të gjendet në membranat e lëmuara dhe plazmatike të qelizave të infektuara (Lazarowitz et al., 1971; Corn-pans, 1973a; Klenk et al., 1974a). Këto të dhëna tregojnë afinitetin e kësaj proteine për membranat.
5. Hemaglutinina
Hemaglutinina sintetizohet si një glikoproteinë e madhe - një pararendës i HA, i cili më pas ndahet në dy glikoproteina më të vogla: HAi dhe HA2 "(Lazarowitz" t al., 1971). Ndarja, e cila mund të shtypet nga frenuesit e proteazës 1973), kryhet, në dukje enzima proteolitike të qelizës pritëse (Lazarowitz et al., 1973) Shkalla e ndarjes varet nga sforcimi i virusit, qeliza pritëse, niveli i efektit citoiatik dhe prania ose mungesa e serumit në medium (Lazarowitz et al., 1971, 1973a, b Klenk and Rott 1973 Stanley et al. serumi Në prani të serumit, megjithatë, hemagglutinina WSN shkëputet gjithashtu.
Sistemi zhvillohet në membranën plazmatike (Lazaro-witz et al., 1973a). Në sistemin VChP, mekanizmi i një ndarjeje të tillë, me sa duket, është i ndryshëm. Ndarja “ndodh në membranat ndërqelizore dhe plazminogeni nuk është i nevojshëm në këtë rast (Shchepk et al., 1974a). Shkalla e ndarjes ulet ndjeshëm tre 25 °C (Klenk, Rott, 1973).
Shkëputja e HA nuk është një kusht i domosdoshëm për aktivitetin e hemaglutinimit dhe për montimin e virionit (Lazarowitz et al., 1973a; Stanley et al., 1973), por studimet e fundit kanë "gjetur se është e nevojshme për infektivitetin (Klenk et al., 1975b ) Këto të dhëna përputhen me hipotezën se, përveç rolit të tij në përthithje, HA* ka një funksion tjetër në procesin infektiv dhe se ndarja është e nevojshme për këtë funksion.qelizat pritëse dhe se grimcat që përmbajnë HA të paçarë janë me infektim të ulët sugjerojnë se diapazoni i bujtësit dhe përhapja e infeksionit të virusit të influencës varen nga prania e proteazës së qelizës pritëse si një enzimë aktivizuese.
Në eksperimentet mbi fraksionimin e "qelizave të infektuara me
virusi i influencës, u konstatua se glikoproteinat HA janë gjithmonë ac
lidhur me membranat (Compans, 1973a; Klenk et al.,.
1974a). Lokalizimi brendaqelizor i këtyre proteinave dhe momenti i tyre
walkie-talkie nga membranat e vrazhda deri tek endolazmatika e lëmuar
retikulumi dhe ndaj membranave plazmatike do të jetë de
janë përshkruar në detaje në seksionin VII, B.. .,
6. Neuraminidaza
U gjet NA* virale si një enzimë aktive,
3 orë pas infektimit në membranën korion-alantoike
nah, dhe me ekstrapolim u zbulua se fillimi i sin
teza ndodh 1-2 orë pas infektimit (Noll et al.,
1961). Lokalizimi ndërqelizor i NA* u studiua nga
fraksionimi i qelizave dhe zbuloi se me sa duket
mu, i ngjashëm me lokalizimin e HA* (Compans, 1973a; Klenk et al.,
1974a). NA* është gjetur në lidhje me membranat,
rrjedh nga rrjeta endoplazmatike e lëmuar
kur përcaktohet me aktivitet biologjik dhe me analizë
zu në xhel poliakrilamid. U zbulua aktiviteti i enzimës
strofull edhe në fraksionet që përmbajnë membrana të vrazhda
ne. Këto të dhëna janë në përputhje me ato të marra me
imunofluoreshencë (Maeno, Kilbourne, 1970). Pas 4 orësh
pas infeksionit, yairaminidaza mund të zbulohet në cito
plazma; më vonë ajo duket se përqendrohet në peri
feria e qelizave.
V. SINTEZA E KARBOHIDRATEVE
Karbohidratet përfshihen në formimin e glikoproteinave dhe glikolilideve të mbështjellësit të virusit të influencës (Klenk et al., 1972a). Glikolipidet e myxoviruseve (që rrjedhin nga membranat plazmatike të qelizës pritëse (Klenk, Choppin, 1970), "por nuk është përcaktuar se çfarë është kryesisht (përfshirë në virion: glikolipide tashmë ekzistuese ose të saposintetizuara.
Përdorimi i prekursorëve radioaktivë si glukozamina, manoza, galaktoza dhe fukoza, të cilat janë të përfshira në mënyrë specifike në glmkopeltides virale, ka treguar se zinxhirët anësore të karbohidrateve të këtyre glikopeptideve risintetizohen gjatë infeksionit (Haslam et al., 1970; aln. , 1970a; Schwarz dhe Klenk, 1974). Eksperimentet e fraksionimit të qelizave kanë dhënë informacion shtesë për vendet e glikozilimit të glikoproteinave virale. Shtypja e sintezës së proteinave nga puromycin pothuajse menjëherë ndalon inkorporimin e glukozaminës, ndërsa fukoza vazhdon të inkorporohet për rreth 10-15 minuta (Stanley et al., 1973).<и НА2 содержат, по-видимому, полный состав маннозы « глюкозамина, тогда как содержание фукозы и галактозы значительно выше в продуктах расщепления (Klenk et al., 1975a; Schwarz, Klenk, 1974). Эта наблюдения предполагают, что биосинтез углеводных боковых целей гликопротеинов НА осуществляется по стадиям с различными остатками Сахаров, добавляемыми в разных участках клетки. Глюкозамин и манноза (присоединяются, по-видимому, к полипептидам НА на шероховатых мембранах вскоре после или даже в процессе синтеза поляпептида, в то время как фукоза, вероятно, прикрепляется позже с помощью трансфераз, присутствующих в гладких мембранах.
Këto glikoziltransferaza janë ndoshta enzima qelizore. Rrjedhimisht, karbohidrati (pjesë e glikoproteinave me sa duket përcaktohet nga qeliza pritëse. Megjithatë, ka të dhëna që, përveç këtyre enzimave të qelizës pritëse, NA* virale luan një rol të rëndësishëm në formimin e vargjeve anësore karbohidrate. Ajo ka është vërtetuar se sipërfaqes së mbështjellësve të miceovirusit i mungon acidi neuraminik (Klenk dhe Choppin, 1970b; Klenk et al., 1970), ndërsa në mbështjelljet virale që nuk përmbajnë këtë enzimë, ky karbohidrat është një përbërës i zakonshëm (Klenk dhe Choppin, 1971 McSharry dhe Wagner, 1971; Renkonen et al., 1971) Këto të dhëna sugjerojnë se
Veprimi i acidit neuraminik është një tipar thelbësor i myxoviruseve. Kohët e fundit është treguar se NA* është përgjegjës për heqjen e acidit neuraminik nga mbështjellja e virusit të influencës, duke parandaluar kështu formimin e receptorëve në mbështjellësin viral që përndryshe do të çonte në formimin e agregateve të mëdha të grimcave virale (Palese et al., 1974 Këto të dhëna mbështesin konceptin se pjesa karbohidrate e HA* si glikoproteina kryesore sipërfaqësore është produkt i veprimit të kombinuar të (transferazave qelizore dhe NA virale*. Nëpërmjet veprimit të tij, virusi është në gjendje të prezantojë një modifikim specifik për virusin në (Fillimisht strukturën e modifikimit të karbohidrateve komplekse specifike për bujtësin, e cila, sipas dukjes thelbësore për aktivitetin biologjik të virusit.
D-glukozamina dhe 2-deoksi-0-glk>dhi pengojnë formimin e HA*, NA* dhe virusit infektiv biologjikisht aktiv (Kilbourne, 1959; Kaluza et al., 1972). Studimet biokimike kanë treguar se këto sheqerna konkurrojnë me biosintezën e glikogroteinave virale (Ghandi et al., 1972; Klenk et al., 1972b). Në prani të këtyre frenuesve zvogëlohet madhësia e glikoproteinës HA.Shkalla e reduktimit varet nga doza.Kështu me rritjen e përqendrimit të sheqerit glikoproteina HA me peshë molekulare relative 76000 gradualisht kthehet në një përbërje me peshë molekulare. prej 64,000, i cili u caktua si HA0 (Klenk et al., 1972b; Schwarz, Klenk, 1974) Zhvendosja e peshës molekulare paralelisht me uljen e përmbajtjes së karbohidrateve dhe proteina HA0 është treguar të jetë pothuajse pa karbohidrate (Schwarz, Klenk, 1974). Këto rezultate tregojnë se HA0 është një zinxhir polipeptid jo-plotësisht i glikoziluar ose i paglikoziluar i glikoproteinës HA dhe se "efekti frenues i D-glukozës aminës a dhe 2-deoksi-0-glukozës ndërmjetësohet nga dëmtimi i glikozilimit. Polipeptidi HA0 është i lidhur me membranat, si HA normale. Ai gjithashtu migron nga rrjeti i ashpër në retikulumin e lëmuar ejadoplastik, ku ndahet në polipeptidet HA01 dhe HA02. ndoshta nuk është thelbësore për afinitetin e këtij polipeptidi për membranën. Megjithatë, mungesa e aktivitetit hemaglutinues në qelizat e infektuara sugjeron që proteina jo e glikoziluar nuk është në gjendje të lidhet me receptorët.
VI. SINTEZA E LIPIDIT
Ashtu si të gjithë viruset e mbështjellë, virusi i gripit fiton lipidet e tij duke përdorur lipidet e qelizave bujtëse. Ky pozicion konfirmohet nga vëzhgimet e mëposhtme.
Denia. Përbërja lipidike e virusit të influencës është gjetur të jetë e ngjashme me atë të qelizës pritëse (Ambruster dhe Beiss, 1958; Frommhagen et al., 1959). Lipidet e qelizave pritëse, të etiketuara në mënyrë radioaktive përpara infektimit, përfshihen në grimcat virale (Wecker, 1957). Kur rritet virusi në qeliza të ndryshme pritëse, zbulohen modifikime të lipideve virale (Kates et al., 1961, 1962). Në përgjithësi, lipidet e viruseve (të cilat dalin nga sipërfaqja e qelizës pasqyrojnë nga afër përbërjen lipidike të membranës plazmatike të qelizës pritëse (Klenk dhe Choppin, 1969; 1970a, b; Renko-nen et al., 1971). osfolilidet në fibroblastin e pulës. qelizat mbetën të pandryshuara për 7 orë pas infektimit me virusin e influencës, pas së cilës e gjithë sinteza e lipideve u shtyp (Blough et al., 1973). sintezën e proteinave, ose te ".efekte të tjera citolitike.
Kështu, bazuar në rezultatet e deritanishme, mund të supozohet se sinteza e lipideve virale kryhet përmes proceseve normale qelizore të biosintezës së lipideve, dhe mbështjellja virale formohet nga inkorporimi i lipideve nga membrana plazmatike e qelizës pritëse.
VII. KUVENDI (shih gjithashtu kapitullin 2)
A. FORMIMI I NUKLEOKAPSIDEVE
Siç është përmendur tashmë, ka shumë të ngjarë që proteina nukleokapsidike të sintetizohet në citoplazmë. Me sa duket, ai është i pranishëm atje për një kohë të shkurtër në formë të lirë, dhe më pas shoqërohet me ARN virale, duke formuar nukleokapside (Klenk et al., 1974; Compans dhe Caliguiri, 1973). Për shkak se proteina NP inkorporohet me shpejtësi në nukleokapsidet, ARN mund të zgjidhet nga grupi n-reformuar (Krug, 1972). Për shkak të madhësisë së vogël të nukleokapsideve të virusit të influencës, ato nuk mund të identifikohen me saktësi në qelizat e infektuara duke përdorur mikroskopin elektronik. Grupet e fijeve ose fibrave me një diametër prej rreth 5 nm, të vëzhguara në citoplazmë, ndoshta përfaqësojnë ribo-nukleoproteina virale (Apostolov et al., 1970; Compans et al., 1970b).
Të dhënat e disponueshme tregojnë se gjenomi ARN i virioneve të virusit të influencës përbëhet nga 5-7 fragmente (shih Kapitullin 6).
Prandaj, çdo grimcë infektive ka nevojë për të paktën një kopje të secilit fragment. Hirst (1962) para
sugjeroi që nukleokapsidet nga grupi ndërqelizor mund të përfshihen në (virionet rastësisht. Përqindja e "virioneve infektive në popullatën E mund të rritet duke përfshirë fragmente shtesë të ARN-së në virusin mesatar (Compans et al., 1970). Për shembull, nëse pesë fragmente të ndryshme të ARN-së, secila virnë përmban gjithsej 7 fragmente të përfshira në rastin e virionit, atëherë afërsisht 22% e virioneve duhet të jenë infektive. Evidenca për përfshirjen e rastësishme të fragmenteve të ARN-së u mbështet nga vëzhgimet e fundit të Hirst (1973 ) që në popullatën virale, ndodh rikombinimi midis grimcave që nuk formojnë pllakë. Aftësia e grimcave të tilla për të marrë pjesë në rikombinim mund të shpjegohet me mungesën e një ose më shumë fragmenteve në grimca, duke ndryshuar fragmentet që mungojnë nga një grimcë në një tjetër, kështu, foletë e përshtatshme të një virusi defekt mund të formojnë rekombinantë.
B. PROCESI I BUDHIMIT TË VIRUSVE
Ashtu si shumica e viruseve të mbështjellë, virusi i influencës mblidhet në membranat qelizore të paraformuara; montimi kryhet duke lulëzuar nga membrana plazmatike. Demonstrimi i parë i çlirimit të një virusi nga një "qelizë me anë të një procesi që nuk përfshin lizë" u prezantua nga Murphy dhe Bang (1952) në studimet e hershme të mikroskopisë elektronike të qelizave të infektuara me virusin e influencës. ■ strukturat sferike. Asnjë grimcë virale nuk u pa brenda qelizave gjatë formimit të "virusit infektiv" dhe, për rrjedhojë, ishte e qartë se grimcat virale ishin formuar në sipërfaqen e qelizës. Duke përdorur antitrupa të etiketuara me ferritinë, antigjeni viral Morgan et al. ato zona ku është formuar virusi. Studimet e mëvonshme të mikroskopisë elektronike kanë treguar se sipërfaqja e virusit që lulëzon përmban të njëjtën membranë si qeliza pritëse me një shtresë zgjatimesh që korrespondojnë me "spikat" virale në sipërfaqen e jashtme. membrana virale, mungon një shtresë shtesë e dendur me elektron në sipërfaqen e qelizës, e cila ndoshta përbëhet nga M-iolypeptide (Bachi et al., 1969; Compans dhe Dimmock, 1969; Apostolov et al., 1970).
Studimet me mikroskop elektronik dhanë bazën për të sugjeruar rendin në të cilin përbërësit viralë të as-
socializohen në membranën qelizore (Bachi et al., 1961; Compans dhe Dimmock, 1969; Compans et al., 1970b).
Së pari shfaqen proteinat e mbështjelljes virale, duke u përfshirë në disa zona të membranës, të cilat duhet të kenë një morfologji normale; megjithatë, adsorbimi specifik i vëzhguar i eritrociteve në këto zona të membranës tregon praninë e proteinës HA këtu. Më pas, me sa duket, proteina M (lidhet me sipërfaqen e brendshme të zonave të tilla të membranave, duke formuar një shtresë të dendur me elektron. Më tej, ribo-nukleoproteina lidhet në mënyrë specifike me membranën në këto zona dhe procesi i lulëzimit ndodh duke u përkulur dhe zgjatja e segmentit të membranës dhe që rrethon ribonukleoproteinën shoqëruese.Të dhënat e elektroforezës së xhelit të poliakrilamidit mbështesin gjithashtu idenë se proteinat e mbështjelljes lidhen me membranën plazmatike më shpejt se RNP-të (Lazarowitz et al., 1971) gjenden në virionet e pastruara. Mbetjet e acidit neuraminik mungojnë në guaskën e grimcave të virusit të influencës që lulëzojnë, por janë të pranishme në rajonet fqinje të membranës qelizore (Klenk et al., 1970).
Këto të dhëna vërtetojnë një tranzicion të mprehtë në përbërjen kimike midis guaskës së një grimce virale që lulëzon dhe membranës qelizore ngjitur.
Megjithatë, nga ana tjetër, një veçori e rëndësishme e procesit të lulëzimit është se mbështjellja virale është e vazhdueshme me membranën plazmatike të qelizës pritëse dhe është morfologjikisht e ngjashme me të (Compans dhe Dimmock, 1969). Siç u përmend, lipidet në këto membrana kanë një ngjashmëri shumë të ngushtë me lipidet e membranës së qelizës pritëse. Këto vëzhgime sugjerojnë që lipidet në membranën plazmatike të paprekur shkëmbehen lehtësisht me lipidet në grimcat virale që lulëzojnë me difuzion radial.
Prandaj, mbështjellja e virionit të lulëzimit formohet nga një pjesë e vogël e membranës qelizore të modifikuar për të përfshirë proteinat e mbështjellësit të virionit. Ky koncept, natyrisht, nuk nënkupton nevojën për të sintetizuar të gjithë përbërësit e mbështjellësit në membranën plazmatike.
Në të vërtetë, dihet për një kohë të gjatë që përbërësit e mbështjellësit duhet të migrojnë në distanca të konsiderueshme nga një vend qelizë në tjetrin, në mënyrë që të kalojnë nga vendi i biosintezës së tyre në vendin e montimit të membranës. Breitenield dhe Schafer (1957) treguan se në qelizat e infektuara me virusin e influencës, HA* mund të shihet fillimisht.
të vendoset në të gjitha pjesët e qelizës dhe të lokalizohet në zonën perinukleare në një përqendrim të shtuar. Më vonë, HA* grumbullohet në "rajonin periferik" të nivelit dhe mund të demonstrohet gjithashtu në filamente të holla që dalin nga membrana e ndezjes.
Nocioni se komponentët e mbështjellësit migrojnë nga brenda qelizës në sipërfaqe është konfirmuar dhe zgjeruar kohët e fundit nga një seri studimesh duke përdorur fraksionimin e qelizave dhe analizën e proteinave virale në fraksione të ndryshme qelizore. Këto punime sugjerojnë gjithashtu se glikoproteina HA, dhe ndoshta proteina të tjera mbështjellëse, sintetizohen në rrjetin endoplazmatik të ashpër (Compans, 1973a; Klenk et al., 1974). Siç u zbulua në eksperimentet e ndjekjes së pulsit, pas disa minutash, HA gjendet tashmë në membranat e retikulit të lëmuar endoplazmatik (Compans, 1973a; Stanley et al.,. 1973; Klenk et al., 1974) dhe në membranën plazmatike (Stanley et al., 1973). Megjithëse eksperimentet për të ndjekur nga rrjeta endoplazmatike e lëmuar në membranën plazmatike nuk janë kryer, duket e besueshme që HA të migrojë nga rrjeti endoplazmatik i ashpër në membranën plazmatike, duke anashkaluar rrjetën endoplazmatike të lëmuar. Duhet të theksohet se gjatë gjithë kohës së një migrimi të tillë, HA dhe proteinat e tjera mbështjellëse janë përbërës të membranave përgjatë të cilave lëvizin; OBI nuk gjenden kurrë si proteina të tretura.
Fraksionet e membranave të lëmuara, të cilat besohet se rrjedhin kryesisht nga retikulumi endoplazmatik, përmbajnë të gjitha proteinat kryesore të mbështjelljes (Compans 1973a; Klenk et al., 1974). Megjithatë, sasitë e tyre relative këtu ndryshojnë nga ato në membranën plazmatike dhe virionin (Stanley et al., 1973; Klenk et al., 1974). Raporti i proteinës M me likoprotektorët NA është më i lartë në mbështjellësin e virionit të pjekur sesa në membranat e retikulit endolasmatik. Këto të dhëna sugjerojnë se vetëm një numër i vogël i membranave që mbartin glikoproteinën HA konvertohen në mbështjellësin viral, përkatësisht, fraksionet e membranave që përmbajnë proteina pa karbohidrate. Siç është përmendur tashmë, sinteza e proteinës M mund të jetë faza që kufizon procesin e montimit të virusit.
Dallimi në shpejtësinë e sintezës së proteinave të ndryshme të mbështjelljes mbështet "hipotezën se montimi i mbështjellësit është një proces me shumë faza. Çështja e procesit të formimit të HA *, duke përfshirë shtimin sekuencial të pjesës së karbohidrateve dhe ndarjen proteolitike gjatë migrimit të produktit të gjenit primar, është në përputhje me këtë koncept.
VIII. LIRIMI I VIRUSIT TË GRIPIT
Problemi i çlirimit të virusit të influencës nga qeliza pritëse,
duket se është e lidhur ngushtë me problemin e funksionit të viralit
NA*, e cila tashmë është diskutuar në detaje më herët (shih
rastet V dhe kap. 4). Se kjo enzimë luan një rol thelbësor
Roli në çlirimin e virusit, buronte nga aftësia e anti
organet specifike për NA* për të shtypur një lëshim të tillë (Se-
tek, Rott, 1966; Webster et al. G968). Për më tepër, këto antitrupa
parandalon elucionin e virusit nga eritrocitet (Brown, Laver,
1968). NA* bakteriale që nuk frenohet nga antitrupat
NA* lamy deri në virale, është në gjendje të çlirojë virusin nga qelizat,
trajtohen me antitrupa të tillë (Compans et al., 1969;
Webster, 1970). Nga ana tjetër, antitrupat bivalente
ndaj NA shkaktojnë gjithashtu grumbullim të virusit (Seto, Chang, 1969;
Compans et al., 1969; Webster, 1970), ndërsa anti njëvalente
trupat nuk e pengojnë çlirimin e virusit, megjithëse frenojnë
mbi 90% aktivitet neuraminidaze (Becht et al., 1971).
Të gjitha këto të dhëna të marra së bashku sugjerojnë se
antitrupat bivalente pengojnë lirimin e virusit
duke e lidhur atë me antigjenet e pranishme në
sipërfaqen e qelizës, dhe duke penguar aktivitetin e fer
polic. Roli i neuraminidazës në çlirimin e virusit të shqyrtimit
ose gjithashtu Palese et al. (G974), i cili konstatoi se ky fer
Është e nevojshme për të hequr acidin neuroamilik nga vi
Sipërfaqja ruse për të shmangur grumbullimin e virioneve - atëherë -
limane në sipërfaqen e qelizës.
IX. FORMAT E PASAKTA TË Mbarështimit
A. RIPRODHIMI ABORTIVE I VARUR I QELIZËS PRITËS
Viruset e gripit mund të infektojnë një shumëllojshmëri të gjerë të qelizave pritëse. Megjithatë, në shumë prej qelizave të infektuara, rendimenti i pasardhësve infektivë është ose shumë i ulët ose i padetektueshëm, megjithëse komponentët viralë mund të zbulohen në titrat normalë.Ky lloj ndërprerjeje e varur nga qeliza bujtëse e ciklit infektiv quhet infeksion abortive. i infektuar në tru me shtame jo-neurotropike të virusit të influencës (Schlesinger, 1953). Sa më e lartë të jetë doza e virusit të administruar, aq më e madhe është sasia e hemagglutininës së saposintetizuar. Janë përshkruar disa sisteme të tjera të virusit të influencës A qelizore-strehuese në të cilat u prodhua vetëm RNP-I. antigjen dhe hemaglutininë, por jo virus infektiv.Në të gjitha këto sisteme të studiuara deri tani, antigjeni RNP u grumbullua në bërthamë dhe nuk u zbulua.
u zbulua nga antitrupat fluoreshente në citoplazmë (Henle et al., 1955; Franklin dhe Breitenfeld, 1959; Ter Meulen dhe Love, 1967; Fraser, 1967).
B. FENOMENI VON MAGNUS
Gjatë kalimeve serike të "viruseve të influencës në një shumësi më të lartë se 1 (Barry, 1961), formohen sasi në rritje të virusit jo të plotë që dalin nga qeliza pritëse (von Magnus, 1951, 1952). Këto grimca virale kanë një sipërfaqe struktura shumë e ngjashme me strukturën e një virusi infektiv, janë imunogjene dhe shkaktojnë ndërhyrje homologe, përmbajnë më pak antigjen ARN dhe RNP, shfaqin një raport më të ulët të infektivitetit ndaj aktivitetit të hemaglutinimit dhe përmbajnë më shumë lipide sesa grimcat e plota virale (von Magnus, 1954; Isaacs, 1959; Pauker et al., 1959; Rott dhe Schafer, 1961; Rott dhe Scholtissek, 1963).
Në analizën e ARN-së së një virusi jo të plotë, u zbulua se ARN virale me një peshë molekulare relativisht të lartë ose mungon ose është e pranishme në sasi të reduktuara, ndërsa sasia e ARN-së me peshë molekulare të ulët rritet (Duesberg, 1968; Pons, Hirst, 1969; Nayak, 1969).
Në qelizat e infektuara me kalimin e dytë të paholluar të virusit të influencës, i gjithë informacioni gjenetik i virusit është i pranishëm, pasi ecRNA e izoluar nga këto "qeliza" është në gjendje të shndërrojë, pas hibridizimit, ARN-në e etiketuar të izoluar nga virusi infektiv në një. formë plotësisht ARN-azorezitive (Scholtissek, Rott, 1969b). Kështu, rritja e sasisë së ARN-së me peshë të ulët molekulare në grimcat jo të plota mund të jetë për shkak të ARN-së me peshë të lartë molekulare, e cila mund të përfshihet në këto grimca në formën e molekulave të shkatërruara dhe, rrjedhimisht, jofunksionale. Kjo ide mbështetet nga dëshmi se me kalimin e paholluar të etur, aftësia për të prodhuar virus infektiv fillimisht zvogëlohet, pas së cilës sinteza e hemagglutininës, neuraminidazës dhe në fund antigjenit RNP zvogëlohet (Scholtissek et al., 1966).
Nayak (1972) zbuloi se gjatë kalimit të parë në shumëfishim të lartë, virusi që u shfaq në fillim ishte plotësisht infektiv dhe dha një model normal të fragmenteve të ARN-së së virusit infektiv në gradientin e saharozës, ndërsa virusi që u shfaq më vonë kishte një profil ARN tipik për një virusi jo i plotë (background -magnus)1.
Ata janë parazitë të detyrueshëm ndërqelizor, që do të thotë se ata nuk mund të riprodhohen ose kalojnë gjenet e tyre pa ndihmë. Vetë grimca e vetme virale (virion) është inerte. Kur një virus infekton një qelizë, ai përdor enzimat dhe pjesën më të madhe të strukturës së qelizës për t'u shumuar.
Ndryshe nga ajo që shohim në proceset e ndarjes së qelizave si p.sh., riprodhimi viral prodhon shumë pasardhës që shkatërrojnë qelizën pritëse dhe më pas infektojnë qelizat e tjera në trup.
Materiali gjenetik viral
Viruset mund të përmbajnë ADN ose ARN të vetme/dyvargëshe. Lloji i materialit gjenetik që gjendet në një virus të veçantë varet nga natyra dhe funksioni i tij. Natyra e saktë e asaj që ndodh pasi strehuesi është infektuar ndryshon në varësi të natyrës së virusit.
Procesi i replikimit për viruset me ADN me dy zinxhirë, ADN me një zinxhir, ARN me dy zinxhirë dhe ARN me një zinxhir do të jetë i ndryshëm. Për shembull, viruset e ADN-së me dy zinxhirë zakonisht duhet të hyjnë në qelizat pritëse përpara se të mund të shumohen. Megjithatë, viruset e ARN-së me një zinxhir replikohen kryesisht në qelizat pritëse.
Pasi virusi infekton bujtësin, përbërësit e pasardhësve viralë prodhohen nga makineri qelizore dhe montimi i kapsidës virale është një proces jo enzimatik. Viruset zakonisht mund të infektojnë vetëm një numër të kufizuar të hostëve. Mekanizmi "kyçe dhe çelës" është shpjegimi më i zakonshëm për këtë fenomen. Disa proteina në grimcat virale duhet të korrespondojnë me disa proteina të receptorit në sipërfaqen qelizore të një bujtësi të caktuar.
Si i infektojnë viruset qelizat?
Procesi kryesor i infeksionit dhe riprodhimit të virusit ndodh në 6 faza:
- Adsorbimi - virusi lidhet me qelizën pritëse.
- Hyrja - virusi fut gjenomin e tij në qelizën pritëse.
- Replikimi i gjenomit viral - Gjenomi viral replikohet duke përdorur strukturën qelizore të bujtësit.
- Asambleja - formohen përbërës viralë dhe enzima, të cilat fillojnë të grumbullohen.
- Maturimi - viruset zhvillohen nga komponentët e montuar.
- Dalje - viruse të reja shpërthejnë nga qeliza pritëse në kërkim të viktimave të reja për infeksion.
Viruset mund të infektojnë çdo lloj qelize, duke përfshirë
NË IRIS NË GRIP: NGJARJET DHE PARASHIKIMET
D.K. Lvov, A.D. Zaberezhny, T.I. Aliper
Dmitry Konstantinovich Lvov, Akademik i Akademisë Ruse të Shkencave Mjekësore, Drejtor i Institutit Kërkimor të Virologjisë me emrin A.I. DI. Ivanovsky RAMS, Shef i Departamentit të Virologjisë, Akademia Mjekësore e Moskës. ATA. Seçenov. Menaxheri i projektit 05-04-52136, 06-04-48822.
Aleksey Dmitrievich Zaberezhny, Doktor i Shkencave Biologjike, Shef i Laboratorit të Diagnostifikimit Molekular të të njëjtit Instituti, Shef i Departamentit të Biologjisë Molekulare në NPO Narvak.
Taras Ivanovich Aliper, Doktor i Shkencave Biologjike, Drejtor i Laboratorit të Mjeteve Specifike të Parandalimit të Sëmundjeve virale të të njëjtit Instituti, Drejtor i NPO Narvak.
Shihni botimin e parë të artikullit: Natyra. 2006. Nr. 6. fq. 3–13.
Epidemitë e gripit ndodhin çdo vit dhe nuk perceptohen si diçka e jashtëzakonshme. Meqenëse sëmundja shkaktohet nga viruse tashmë të njohura për sistemin imunitar, ajo
ata zakonisht shkojnë mirë. Pandemia është një çështje tjetër: në këtë rast, agjenti shkaktar i gripit është një virus me veti të reja antigjenike dhe biologjike, që përhapet me shpejtësi rrufeje në botë, duke prekur deri në një të katërtën e popullsisë së planetit dhe duke marrë dhjetëra miliona jetë. Kjo pandemi e “famshme” e shekullit të kaluar. Ishte e pamundur t'i parashikosh ato, ashtu siç, megjithatë, është e pamundur të përmendet koha e saktë e fillimit të një të reje.
Megjithatë, falë monitorimit të vazhdueshëm të viruseve që qarkullojnë mes njerëzve, kafshëve shtëpiake dhe të egra, si dhe njohurive të marra duke përdorur metoda gjenetike molekulare, tashmë është e mundur të parashikohet shfaqja e varianteve të reja të virusit me tendenca pandemike. Vitet e fundit, është identifikuar një pretendent për këtë rol: në fund të vitit 2003, virusi fillimisht jopatogjen H5N1 i shpendëve shkaktoi një epizootikë gripi te shpendët shtëpiak, i cili këtë vit u shndërrua në një panzootik. Ky virus ka filluar të infektojë kafshë të tjera, përfshirë njerëzit, por deri më tani nuk mund të transmetohet nga personi në person. Për ta fituar këtë aftësi, mjafton të zëvendësohet vetëm një aminoacid në një nga proteinat virale.
Strukturat e Virionit
Virusi i gripit ka një strukturë mjaft të thjeshtë: është një grimcë sferike (virion) me një diametër prej rreth 0,13 mikron, në bërthamë, e cila përmban nukleokapsidin (një molekulë ARN e paketuar në një guaskë të proteinës M1), e rrethuar nga një lipid. membrana (Fig. 1). Në këtë membranë janë zhytur tre proteina - hemagglutinina, neuraminidaza dhe një kanal jonik (proteina M2), të cilat luajnë një rol të madh në procesin infektiv.
Hemaglutinina është e para që bie në kontakt me receptorët e qelizave bujtëse. Në sipërfaqen e mbështjellësit viral paraqitet në formën e trimerëve shumë kompleksë. Secili prej monomereve të tyre është i ankoruar fort në membranë dhe përmban dy nënnjësi - njëra prej tyre siguron kontakt parësor me qelizën e synuar, tjetra është përgjegjëse për shkrirjen e membranave virale dhe qelizore. Në pjesën e sipërme të proteinës, ka vende që lidhen me acidin sialik, i cili është pjesë e receptorit të qelizave pritëse.
Enzima neuraminidaza shkëput grupet terminale të acidit sialik të receptorëve qelizor, si rezultat i së cilës qeliza humb aftësinë për të njohur antigjenin dhe virusi depërton.
BIOLOGJI DHE SHKENCA MJEKËSORE | Viruset e gripit: ngjarje dhe parashikime |
hyn në të me endocitozë, mënyra e zakonshme e dërgimit të substancave në qelizë. Mjedisi acidik i endozomës që lulëzon nga membrana qelizore aktivizon kanalin jonik M2, i cili ul pH brenda grimcës virale, gjë që çon në shkatërrimin e guaskës së proteinës M1. Në të njëjtën kohë, aktivizohet hemaglutinina. Ai sintetizohet në formën e një prekursori, i cili në një mjedis acid kalon në një gjendje të pjekur - nga enzimat proteolitike ndahet në dy nënnjësi, ndërsa peptidi i shkrirjes i fshehur brenda trimerit ndryshon konformacionin, lirohet, lëviz në skajin e sipërm. të molekulës dhe futet në membranë. Zarfi viral bashkohet me atë endosomal, formohet një pore shkrirjeje, përmes së cilës hapet një rrugë për materialin e huaj gjenetik në citoplazmë. Më pas ARN virale hyn në bërthamën e qelizës. Si rezultat, proceset jetësore janë të shqetësuara në qelizë dhe ajo vetë, duke përdorur burimet e veta, fillon të prodhojë proteina virale. ARN-ja virale replikohet menjëherë dhe grumbullohen grimca të reja virale, të cilat lirohen nga qelizat e dëmtuara me ndihmën e neuraminidazës (produktet e prishjes së tyre shkaktojnë intoksikim të trupit dhe gjendje të ethshme) dhe barten në të gjithë trupin me qarkullimin e gjakut.
Fig. 1. Skema e virionit të virusit të influencës. Membrana e saj lipoproteinike është e mbuluar me gjemba të dy glikoproteinave - hemagglutininës dhe neuraminidazës. Brenda është nukleokapsidi, një molekulë ARN e mbështjellë në një guaskë të proteinës M1. Gjenomi përbëhet nga tetë fragmente, nga të cilat gjashtë të parat kodojnë nga një proteinë secila (hemaglutinina - HA, neuraminidaza - NA, nënnjësitë e polimerazës ARN - PB1, PB2, PA, nukleoproteina
NP), dhe dy gjenet e fundit - dy proteina me sekuenca unike të aminoacideve.
pa acide (proteinat e matricës - M1, M2 dhe proteinat jostrukturore - HS1, HS2).
Virusi shumëfishues depreson sistemin hematopoietik dhe imunitar, dëmton endotelin e kapilarëve, gjë që çon në rritje të përshkueshmërisë vaskulare dhe hemorragji deri në edemë cerebrale me përfundim fatal. Por kjo ndodh mjaft rrallë, sistemi imunitar zakonisht ndizet - së pari, përfshihen faktorë të imunitetit të lindur (jo specifik), dhe pas një kohe, fillojnë të prodhohen antitrupa specifikë që lëshojnë dhe, pas ri-infeksionit, mbrojnë trupin. nga virusi.
Një tipar dallues i viruseve të gripit është ndryshueshmëria e lartë e vetive antigjenike. Proteinat e brendshme janë strukturore konstante dhe përcaktojnë llojin e virusit (A, B dhe C). Përkundrazi, antigjenet sipërfaqësore janë heterogjene dhe të ndryshueshme dhe në një masë më të madhe
BIOLOGJI DHE SHKENCA MJEKËSORE | Viruset e gripit: ngjarje dhe parashikime |
penisit, kjo ka të bëjë me hemagglutininën (H), e cila së bashku me neuraminidazën (N) përcakton nëntipin e virusit (H1N1, H2N2, H3N2, etj.). Ndryshueshmëria antigjenike e proteinave sipërfaqësore është për shkak të dy proceseve gjenetike - ndryshimeve të zhvendosjes dhe zhvendosjes në gjenomën virale.
Ndryshimet drift shkaktohen nga mutacionet pika në gjenet që kodojnë hemagglutininën dhe neuraminidazën dhe çojnë në ndryshime të vogla në strukturën e këtyre proteinave. Si rregull, ndryshime të tilla ndodhin ndërmjet pandemive në të gjitha llojet e viruseve (A, B dhe C). Si rezultat, epidemitë, dhe jo pandemitë, ndodhin çdo vit, pasi mbrojtja nga ekspozimi i mëparshëm ndaj virusit ruhet, megjithëse është i pamjaftueshëm.
Ndryshimet e zhvendosjes ndodhin pas një zëvendësimi të plotë të gjenit. Kjo është e mundur sepse gjenomi i virusit të influencës është i segmentuar - ai përbëhet nga tetë fragmente të ARN lineare me një fije floku, që kodojnë, përveç hemagglutininës dhe neuraminidazës, një enzimë specifike për virusin (ARN polimeraza ose transkriptaza, e përbërë nga tre nënnjësi - proteina PB1, PB2, PA), si dhe një nukleoproteinë (NP), matricë (M1 dhe M2) dhe proteina jo-strukturore (NS1 dhe NS2). Kur një qelizë infektohet njëkohësisht me dy shtame të ndryshme, segmentet e gjenomave të tyre riprodhuese përzihen në çdo kombinim, kështu që virionet e reja përmbajnë grupe të ndryshme gjenesh të huazuara nga secili prej viruseve origjinale. Një kombinim i tillë i segmenteve të ARN-së virale quhet riorganizim gjenetik, për të mos u ngatërruar me termin tashmë ekzistues - rikombinim, gjatë të cilit materiali gjenetik riorganizohet ose nga mekanizmi i kryqëzimit ose si rezultat i një ndryshimi shabllon. Ndryshimet e zhvendosjes, si rregull, ndikojnë në strukturën antigjenike të hemagglutininës, më rrallë - neuraminidaza. Kështu, në intervale të parregullta (10-40 vjet), shfaqen viruse me veti të reja antigjenike dhe biologjike, duke përfshirë variante të reja pandemike.
Barriera e specieve
Ndër viruset që mund të shkaktojnë situata ekstreme epidemike, lufta kundër të cilëve në fazën e shfaqjes së tyre është e vështirë apo edhe e pamundur, janë veçanërisht të rrezikshëm viruset e gripit A. Ato karakterizohen nga heterogjeniteti i lartë antigjenik i proteinave sipërfaqësore dhe përfaqësohen, sipas nomenklatura, nga 16 neuraminidaza (N1-9). Këto viruse janë të përhapur në natyrë dhe mund të infektojnë të gjitha llojet e shpendëve dhe disa lloje gjitarësh (njerëzit, kuajt, derrat, balenat, fokat, etj.). Infeksioni i gjitarëve ndodh kryesisht përmes traktit respirator, zogjve - përmes zorrëve. Infeksioni i tyre është zakonisht asimptomatik ose në formën e enteritit, gjë që tregon një shkallë të lartë të përshtatjes reciproke të viruseve të gripit dhe shpendëve të egër, të cilët mund të konsiderohen si nikoqirë të tyre natyrorë. Virusi vazhdon në ujë, në +22°C - deri në një muaj, në +4°C dhe më poshtë - për një kohë më të gjatë (6-8 muaj), prandaj rruga e infeksionit ujë-fekale është mekanizmi kryesor për mbajtjen e një qarkullimi konstant të virusit të gripit në natyrë.
Pavarësisht heterogjenitetit antigjenik, viruset me të gjitha kombinimet e njohura të proteinave sipërfaqësore janë izoluar vetëm nga zogjtë e egër të komplekseve ujore dhe gjysmë ujore - rosat, pulëbardha, etj. (Fig. 2).
Midis kafshëve të tjera, qarkullojnë vetëm viruse me një grup të caktuar proteinash sipërfaqësore: për shembull, viruset e vetëm tre nënllojeve të hemagglutininës (H1-H3) dhe dy neuraminidazave (N1-N2) janë izoluar nga njerëzit deri vonë. Të katër pandemitë e shekullit të 20-të ishin për shkak të varianteve të reja të ndërrimit të këtyre nëntipave: "gripi spanjoll" në 1918 u shkaktua nga nëntipi i virusit të gripit A H1N1, "gripi aziatik" në 1957 - H2N2, "gripi i Hong Kongut" në 1968 - H3N2 dhe "gripi rus" në 1977 - H1N1. Të gjithë janë ribashkues të viruseve të gripit të shpendëve dhe atyre të influencës njerëzore.
BIOLOGJI DHE SHKENCA MJEKËSORE | Viruset e gripit: ngjarje dhe parashikime |
Deri kohët e fundit, besohej se viruset e gripit të shpendëve nuk janë patogjenë për njerëzit dhe, nëse infektohen, mund të shkaktojnë vetëm konjuktivit dhe sëmundje të lehtë, në raste të rralla, një sindromë të lehtë të frymëmarrjes. Megjithatë, në vitin 1997, viruset H5N1 shkaktuan sëmundje jashtëzakonisht të rënda në mesin e njerëzve në Hong Kong - nga 18 persona që u sëmurën, gjashtë vdiqën, të gjithë të infektuar nga pulat. Episodi i dytë i ngjashëm ndodhi në shkurt 2003, gjithashtu në Hong Kong - nga pesë persona të infektuar, dy vdiqën. Viruset H5N1 janë izoluar periodikisht nga pulat dhe speciet e tjera të shpendëve (përfshirë zogjtë e egër) në popullatat lokale.
Fig.2. Skema e qarkullimit të nëntipave të njohur të viruseve të influencës A.
Virusi i serotipit H9N2, i cili është i përhapur në mesin e shpendëve në Kinë dhe vende të tjera aziatike, u zbulua në pesë kinezë në gusht 1998 dhe një vit më vonë në Hong Kong në dy vajza me një sëmundje të ngjashme me gripin. Vlen të përmendet se të gjitha rastet e sëmundjeve kanë ndodhur në mënyrë të pavarur nga njëra-tjetra dhe nuk është vërejtur transmetimi i viruseve nga personi në person. Në vitin 1996, virusi i gripit të shpendëve H7N7 u izolua nga një grua me konjuktivit. Një rast në Holandë përfundoi me vdekje. Këto janë vetëm ato raste që janë regjistruar zyrtarisht, por në realitet, viruset e influencës së shpendëve kapërcejnë pengesën e specieve, me sa duket shumë më shpesh dhe fillojnë të infektojnë jo vetëm njerëzit, por edhe kafshët e tjera (derrat, kuajt, balenat, minks, etj.) . Janë të njohura rastet e infektimit të shpendëve (pulave, gjelave) me viruse të gripit karakteristik për shpendët e egër, veçanërisht shpendët e ujit.
Është ende e vështirë të gjykosh me besim të gjithë faktorët që kufizojnë gamën e strehuesve të virusit dhe mekanizmat që ndikojnë në ndryshimin e strehuesit. Një kërkim i tillë po kryhet dhe ka qenë për një kohë të gjatë në grupe të ndryshme kërkimore, përfshirë edhe institutin tonë.
Hemaglutinina ishte e para që u dyshua, pasi është kjo glikoproteinë që është përgjegjëse për njohjen e receptorëve të qelizave pritëse dhe është e përfshirë në shkrirjen e mbështjellësit viral me endosomën (në fakt, pjesë e membranës citoplazmike të qelizës pritëse). Struktura e këtyre receptorëve ndryshon në varësi të specieve dhe origjinës së indeve të qelizave. Këto dallime janë të rëndësishme në kufizimin e transferimit të viruseve midis specieve dhe janë studiuar veçanërisht në lidhje me shfaqjen e viruseve të reja pandemike njerëzore.
Është vërtetuar se receptorët e qelizave epiteliale të traktit respirator të njeriut, përveç proteinave, përmbajnë karbohidrate - sialooligosakaride, në të cilat acidi sialik terminal (acidi N-acetilneuraminik) është i lidhur me galaktozën me një lidhje 2'-6'. dhe receptorët e qelizave
BIOLOGJI DHE SHKENCA MJEKËSORE | Viruset e gripit: ngjarje dhe parashikime |
epiteli i zorrëve të shpendëve - 2'-3'. Viruset e gripit të shpendëve nuk riprodhohen mirë te njerëzit, sepse ata thjesht nuk mund të lidhen me receptorët njerëzorë. Në të njëjtën kohë, mucinat (nga natyra të njëjtat glikoproteina komplekse me acid sialik në fund), të cilat kërkohen për të mbrojtur mushkëritë e njeriut nga mikroorganizmat, përmbajnë receptorë me një lidhje galaktoze 2'-3'. Kështu, një virus i gripit të shpendëve që hyn aksidentalisht në trupin e njeriut nuk mund të depërtojë në qeliza, pasi nuk ka receptorë specifikë në sipërfaqen e tyre, dhe aktiviteti njohës i receptorëve të virionit bllokohet nga mucina, kështu që një person në këtë rast përballet vetëm me një rrjedhje të lehtë. hundë.
Por në këtë rast, si të shpjegohet shfaqja e varianteve të ndryshimit pandemik të virusit? Situata u qartësua pak kur u bë e ditur se qelizat e traktit respirator të derrit mbartin të dy llojet e receptorëve dhe, në përputhje me rrethanat, mund të infektohen si nga viruset e influencës njerëzore ashtu edhe nga ato të shpendëve. Kjo do të thotë që derrat mund të shërbejnë si një pritës i ndërmjetëm për viruse të ndryshme dhe një arenë ideale për riorganizimin e tyre në infeksione të përziera.
Në lidhje me hemagglutininën, aftësia e saj për të njohur receptorët e qelizave pritëse duket se lidhet kryesisht me strukturën e vendit të lidhjes së receptorit (PCS). Kështu, në viruset e influencës njerëzore, PCC përmban aminoacidet leucinë dhe serinë në pozicionet përkatësisht 226 dhe 228, ndërsa te viruset e shpendëve këto pozicione janë glutamina dhe glicina. Zëvendësime të tjera të aminoacideve janë gjetur në PCC në kafshë të ndryshme, që do të thotë se megjithëse PCC është e konservuar dhe e qëndrueshme nga ana evolucionare, ajo ende ka rajone të ndryshueshme që ndikojnë në lidhjen (affinitetin) dhe specifikën e receptorit.
RCC mund të ndryshojë pasi virusi kapërcen barrierën ndërspeciale, ndërsa viruset e influencës së shpendëve, për shembull, mund të fitojnë aftësinë për të njohur receptorët e qelizave njerëzore. Dëshmi se barriera e specieve shpend-njeri mund të kapërcehet është shpërthimi i gripit njerëzor i vitit 1997 në Hong Kong, i shkaktuar nga virusi i shpendëve H5N1.
Supozohet se "lidhja" e virusit me bujtësin përcaktohet jo vetëm nga karakteristikat e hemagglutininës, por edhe nga një proteinë tjetër sipërfaqësore - neuraminidaza. Përveç kësaj, ka arsye për të besuar se gjenet e proteinave të brendshme dhe jostrukturore të viruseve të influencës A janë të përfshirë në kufizimin e gamës së bujtësve. Megjithatë, është shumë herët të flasim për këtë, pasi është ende e nevojshme të studiohet kontributi i çdo gjen dhe funksionet e produkteve të tyre. Sido që të jetë, është e rëndësishme të kuptohet se edhe ndryshimet minimale në strukturën e proteinave virale, veçanërisht hemagglutininës, mund të çojnë në ndryshime të rëndësishme jo vetëm në gamën e pritësit të virusit, por edhe në shkallën e patogjenitetit të tij (virulenca ).
Virulencë
Kujtojmë që për riprodhimin e virusit në organizmin bujtës është i nevojshëm aktivizimi i pararendësit të molekulës së hemagglutininës, ndërkohë që ajo ndahet nga proteazat bujtëse në dy nënnjësi. Proteoliza e hemaglutininave të viruseve të shpendëve me patogjene të ulët ndodh në një numër të kufizuar llojesh qelizash, kështu që virusi lokalizohet vetëm në traktin respirator ose të zorrëve. Kjo ndodh me infeksione asimptomatike ose të moderuara. Hemaglutininat e viruseve të shpendëve shumë patogjenë degradohen në qeliza të ndryshme dhe për këtë arsye janë të afta të shkaktojnë infeksione sistemike vdekjeprurëse, veçanërisht te shpendët.
Në laboratorë të ndryshëm anembanë botës, ata filluan të studiojnë gjenomën e shtameve të viruseve të gripit që janë shumë patogjenë për njerëzit (H5N1 dhe H7N7, të izoluara në vitet 1997-2004). Rezultoi se këto viruse përmbajnë disa aminoacide bazë në vendin e ndarjes së molekulës së hemagglutininës, e cila u siguron atyre aktivitet të lartë infektiv dhe patogjenitet. Ndryshe nga viruset jopatogjenë ose pak patogjenë, të cilët nuk e kanë këtë sekuencë aminoacide, hemagglutinina e viruseve shumë patogjene shkëputet lehtësisht jo vetëm nga proteazat e ngjashme me tripsinën e pranishme në qelizat e traktit respirator të njeriut dhe në zorrët e shpendëve, por edhe nga proteazat e ngjashme me furin. Ato funksionojnë në kombinim
BIOLOGJI DHE SHKENCA MJEKËSORE | Viruset e gripit: ngjarje dhe parashikime |
me ubiquitin, i krijuar për të shënuar proteinat për proteazat që duhet të shkatërrohen. Proteazat e ngjashme me furinën sintetizohen në inde të ndryshme, gjë që u jep viruseve patogjene aftësinë për të infektuar sisteme dhe organe të ndryshme. Futja e qoftë edhe një aminoacidi bazë në vendin e ndarjes proteolitike të hemagglutininës është i mjaftueshëm për të kthyer një virus me patogjen të ulët në një virus shumë patogjen.
Më pas, kjo u konfirmua në eksperimentet me minj të infektuar me variante të ndryshme (të izoluara në vite të ndryshme) të virusit H5N1. Disa prej tyre filluan të shumohen në tru, mëlçi, shpretkë dhe qelizat e gjakut, duke shkaktuar vdekjen 100% të minjve në ditën e shtatë dhe të tetë pas infektimit, ndërsa viruset e tjerë rezultuan të ishin jopatogjenë për minjtë dhe u shumuan vetëm në mushkëritë. Së shpejti, kjo u shpjegua gjithashtu - në viruset H5N1 të izoluar në 2004, në krahasim me viruset e marra në 1997-2003, u zbuluan mutacione shtesë në gjenin e hemaglutininës, të cilat ndikuan në ndryshimin e vetive të tyre antigjenike.
Patogjeniteti i virusit mund të ndikohet nga ndryshimet në strukturën jo vetëm të proteinave sipërfaqësore, por edhe të brendshme. Për shembull, një mutacion në pozicionin 627 në proteinën PB2 u gjet në një lloj të virusit të influencës H5N1 që është shumë patogjen për minjtë. Ishte ky mutacion që ndikoi në ndryshimin në vetitë e dy viruseve H5N1 të izoluar në Hong Kong dhe, si rezultat, në rezultatin e procesit infektiv. Për më tepër, virulenca e këtyre viruseve të gripit shoqërohet me veçori strukturore të proteinës NS jo-strukturore, në veçanti, me praninë e acidit glutamik në pozicionin 92 në molekulën e tij, gjë që i bën viruset rezistente ndaj efektit antiviral të interferoneve.
Sigurisht, përdorimi i metodave moderne gjenetike molekulare në studimin e viruseve të gripit sqaron gradualisht vetitë e tyre biologjike, por jo më pak të rëndësishme janë metodat tradicionale që monitorojnë qarkullimin e viruseve të gripit midis njerëzve, kafshëve shtëpiake dhe të egra. Parashikimi i shfaqjes së reasorantëve me tendenca pandemike dhe zhvillimi i masave efektive për parandalimin dhe kontrollin e gripit mund të zhvillohet vetëm në bazë të studimit të ekologjisë dhe evolucionit të agjentëve shkaktarë të kësaj sëmundje infektive të vështirë për t'u parashikuar dhe e vështirë për t'u kontrolluar. . Studime të tilla kanë filluar më shumë se 35 vjet më parë nga G. Laver në Australi, R. Webster në SHBA, D.K. Lvov në vendin tonë, dhe ato po zhvillohen edhe sot e kësaj dite në të gjithë botën.
Ngjarjet dhe parashikimet
Një studim gjithëpërfshirës i viruseve të gripit A u iniciua nga Organizata Botërore e Shëndetësisë (OBSH) pas pandemisë së vitit 1968 të shkaktuar nga virusi H3N2. Instituti ynë zbuloi se paraardhësi i H3N2 ishte një lloj i ngjashëm me virusin H3N8 të izoluar në Ukrainë në vitin 1963 nga rosat e egra. Këto dhe të dhëna të tjera shërbyen si bazë për zhvillimin e drejtimit shkencor - ekologjia dhe evolucioni i viruseve të influencës A. Qendra Kombëtare për Ekologjinë e Viruseve të Influencës A u krijua me një rrjet bazash referimi, ku u morën të dhëna të reja. duke konfirmuar mungesën e dallimeve thelbësore midis viruseve të influencës A të njeriut dhe kafshëve, t .e. prania e një grupi të vetëm gjenik të mbrojtur. Sipas këtyre të dhënave, në vitin 1980 u krijua një klasifikim i viruseve të gripit, pavarësisht nga origjina e tyre. Që atëherë, çdo virusi të izoluar i është caktuar një emër që pasqyron llojin e virusit, burimin e izolimit, vendin dhe vitin e izolimit, si dhe një nëntip - për shembull, A / duck / Ukraine / 63 (H3N8).
Objektivi kryesor i kërkimit tonë në Rusi ishte studimi i evolucionit të viruseve të influencës A në procesin e ndërveprimit të popullatave virale me popullatat e shpendëve të egër dhe kafshëve shtëpiake dhe formimin e shtameve me fuqi epidemike. Për ta bërë këtë, monitorimi kryhet në pika kyçe në Euroazinë Veriore; 14 nga 16 viruse të njohura u izoluan
Në fund të vitit 2003, d.m.th. tre muaj para fillimit të epizootikës së shkaktuar nga virusi i gripit të shpendëve H5N1 në vendet e Azisë Juglindore, një nga autorët e këtij artikulli (D.K. Lvov) foli në Kongresin Ndërkombëtar të Influencës në Japoni, duke njoftuar izolimin e këtyre viruseve.
BIOLOGJI DHE SHKENCA MJEKËSORE | Viruset e gripit: ngjarje dhe parashikime |
nga zogjtë e egër në Rusi - në Altai dhe në jug të Primorye. Sipas të dhënave gjenetike molekulare, këto shtame klasifikohen si patogjene të ulëta. Më pas, në analogji me vëzhgimet e mëparshme, u bë parashikimi i parë për mundësinë e futjes së tyre me zogj shtegtarë në fermat e shpendëve të Azisë Juglindore, ku pas disa kohësh mund të shndërrohen në shumë patogjenë me potencial panzootik dhe pandemik. Me sa duket, kështu ka ndodhur. Shpërthimi i epizootikës në një kohë të shkurtër përfshiu 10 vende. Që atëherë, më shumë se 150 milionë pula dhe rosa janë vrarë dhe therur. Sipas OBSH-së, deri në fund të marsit 2006, 185 njerëz ishin infektuar tashmë, 104 prej të cilëve vdiqën. Epizootiku vazhdon dhe viruset kanë depërtuar në popullatat e derrave, gjë që është një shqetësim i veçantë. Ndoshta bota është në prag të një katastrofe epidemiologjike: reasorantët mund të formohen në çdo kohë kur derrat infektohen njëkohësisht me virusin H5 të shpendëve dhe viruset e influencës njerëzore H1 ose H3 që qarkullojnë nëpër botë.
U bë edhe një parashikim i dytë: në rast të infektimit në zonat dimëruese të shpendëve të egër me shtame shumë patogjene, rreziku i futjes së tyre në territorin e Rusisë rritet, veçanërisht në Siberi dhe Lindjen e Largët, gjatë migrimeve pranverore. Dhe më pas ndodhi diçka që duhej të ndodhte. Në mesin e korrikut 2005, në vendbanimet e rajonit të Novosibirsk, të vendosura brenda stepës pyjore veriore të liqenit të ultësirës Baraba, u zbulua një epizootikë midis shpendëve me një shkallë vdekshmërie mbi 90% dhe një përhapje të shpejtë.
Materialet u mblodhën nga shpendët shtëpiak dhe të egër që jetojnë në afërsi të zonës epizootike. Duke përdorur linjat qelizore SPEV dhe MDCK (kjo metodë jo standarde është aktualisht duke u patentuar), ne izoluam gjashtë shtame të H5N1 nga shpendët dhe grebat (Podiceps cristatus ), me përqendrime shumë të larta të virusit në inde. Me një prioritet të 8 gushtit 2005, këto shtame u depozituan në Koleksionin Shtetëror të Viruseve dhe të dhënat e sekuencës së gjenomit të tyre me gjatësi të plotë u depozituan në GenBank me prioritet 5 shtator 2005. Vendi i prerjes proteolitike të hemagglutininës së të gjitha shtameve të fituara përmban sekuencën aminoacide PQGERRRKKRGLF, e cila është karakteristike për viruset e influencës avian shumë patogjene. Sekuencat nukleotide të gjeneve të hemagglutininës së të gjithë viruseve të analizuara të shpendëve rezultuan të jenë plotësisht identike, por ndryshojnë nga shtami i izoluar nga zogu i egër (grebe me kreshtë), megjithëse vetëm nga dy zëvendësime të nukleotideve (Fig. 3). Analiza filogjenetike zbuloi një nivel të lartë të homologjisë së hemagglutininave të shtameve të Siberisë Perëndimore me shtame të izoluara në pranverën e të njëjtit vit nga pata malore (Anser indicus) në liqen. Kukunor në provincën veriperëndimore të Qinghai (PRC). Kjo u vërtetua plotësisht nga analiza e shtatë gjeneve të mbetura.
Identiteti i karakteristikave gjenetike të shtameve të izoluara dëshmon një lidhje të drejtpërdrejtë midis viruseve që qarkullojnë në popullatat e shpendëve të egër dhe shtëpiak. Në të njëjtën kohë, shtamet e virusit të influencës H5N1 të zbuluara në vitin 2005 ndryshojnë ndjeshëm nga shtamet e këtij virusi të izoluar në vitet e mëparshme, duke përfshirë shtamin A/Vietnam/1194/2004(H5N1) të marrë nga Anglia, i cili ofrohet në vendin tonë. vendi për prodhimin e vaksinave. Është e qartë se, të paktën për një vaksinë veterinare, mund të përdoret vetëm një lloj nga Koleksioni Shtetëror i Viruseve, i cili për nga vetitë antigjenike korrespondon me virusin që qarkullon në Rusi.
Lloji që ne izoluam, i depozituar në Koleksionin Shtetëror të Viruseve, po përdoret tashmë për prodhimin e vaksinave në shkallë të gjerë në Fermën e Shpendëve të Stavropolit. Shpendët janë vaksinuar në Distriktin Federal Jugor. Deri më 15 qershor 2006, ishte planifikuar të prodhoheshin 15 milionë doza vaksine me zgjerim të mëtejshëm të prodhimit.
Nga rruga, në një pandemi, kur është e nevojshme të krijohet shpejt prodhimi i një vaksine, këshillohet, sipas mendimit tonë, të përdoren si një substrat linjat qelizore në të cilat virusi i gripit grumbullohet me shpejtësi në përqendrime të larta. Kjo metodë e zhvilluar rishtazi ka përparësi të konsiderueshme në krahasim me metodën tradicionale, e cila përdor
BIOLOGJI DHE SHKENCA MJEKËSORE | Viruset e gripit: ngjarje dhe parashikime |
Përdoren embrionet e pulës: duke ruajtur të gjitha domenet antigjenike të hemagglutininës, vaksina kulturore eliminon shfaqjen e komplikimeve të lidhura me proteinat e pulës. Kjo është veçanërisht e rëndësishme në prodhimin e vaksinave njerëzore. Thjesht duhet të dini se cili lloj duhet të përdoret për të imunizuar njerëzit. Kjo do të varet nga karakterizimi antigjenik i variantit të pandemisë që rezulton. Ndoshta do të jetë ndryshe nga ajo që është tani. Në çdo rast, përdorimi i një vaksine të gjallë është absolutisht i papranueshëm. Ndërveprimi gjenetik midis vaksinës dhe viruseve të fushës mund të çojë në ribashkim me pasoja të paparashikueshme.
Fig.3. Shkalla e lidhjes së sekuencave nukleotide të gjenit hemagglutinin të varianteve të virusit të influencës A të nëntipit H5 të izoluar nga zogjtë e egër dhe shtëpiakë në vende të ndryshme gjatë 10 viteve të fundit. Llojet H5N1 shumë patogjene të grupit të viruseve Qinghai-Novosibirsk janë theksuar me shkronja të zeza.
Analiza e gjenomit të shtameve që ne izoluam zbuloi një sërë veçorish që lidhen me vetitë biologjike. Përveç sekuencës aminoacide të zonës së ndarjes proteolitike të hemaglutininës, e cila përcakton nivelin e lartë të patogjenitetit të virusit, u gjetën delecione në pozicionin 49-68 në neuraminidazën (gjenotipi Z), që tregon një tropizëm të shtuar të viruseve të izoluar nga ne ndaj shpendëve dhe patogjenitetit të mundshëm për njerëzit. Acidi glutamik në pozicionin e 92-të të proteinës NS1 përcakton rezistencën e virusit ndaj veprimit të interferonit dhe rritjen e virulencës për derrat. Lizina në pozicionin 627 të proteinës PB2 shpjegon aftësinë e shtameve të studiuara për t'u riprodhuar në linja të ndryshme qelizore të gjitarëve. Karakteristikat e zbuluara të virusit që depërtoi në territorin e Rusisë dëshmojnë për patogjenitetin e tij të lartë në raport me zogjtë dhe njerëzit shtëpiak.
Prania e serinës, në vend të asparaginës, në pozicionin e 31-të të M2 tregon ndjeshmërinë e virusit ndaj rimantadinës, e cila përkoi plotësisht me të dhënat e një studimi të drejtpërdrejtë të efektit të barnave antivirale në riprodhimin e virusit. Për këto qëllime, ne përdorëm edhe linjat qelizore dhe zbuluam se si barnat e huaja të shtrenjta, si Tamiflu, ashtu edhe ato vendase relativisht të lira që gjenden në farmaci, rimantadina, janë po aq efektive për parandalimin dhe trajtimin e hershëm të gripit dhe mund të përdoren. .
BIOLOGJI DHE SHKENCA MJEKËSORE | Viruset e gripit: ngjarje dhe parashikime |
virazol (me aplikim intravenoz dhe aerosol), arbidol. Fatkeqësisht, aktualisht në vend nuk ka ose nuk ka prodhim të mjaftueshëm të këtyre barnave dhe është urgjente krijimi i rezervave strategjike të tyre.
Si dhe kur hyri virusi i gripit H5N1 shumë patogjenik në Rusi dhe si do të zhvillohen ngjarjet e mëtejshme?
Fig.4. Mënyrat e përhapjes së virusit të gripit H5N1 në popullatat e shpendëve të egër dhe shtëpiak. Viruset e influencës patogjene të ulëta (LPVV) të izoluara nga zogjtë e egër dhe shtëpiakë në rajonin verilindor të Altai Krai në 1991 dhe në jug të Primorsky Krai në 2001 ishin me sa duket pararendës të shpërthimit të gripit të vitit 1997 në Hong Kong dhe epizootikëve3 në Azinë jugore20. -2005, si dhe në Kinën veriperëndimore në vitin 2005. Pasi u bënë shumë patogjene (HPA), këto viruse depërtuan gjatë migrimit pranveror të shpendëve të egër në Siberinë Perëndimore, ku në verën e vitit 2005 shkaktuan një shpërthim të gripit te shpendët. Gjatë periudhës së migrimit të shpendëve të kompleksit ujor dhe gjysmë ujor, HPVH u përhap më tej në veri dhe perëndim të Euroazisë, dhe në dimrin e vitit 2006, këto viruse u zbuluan tashmë në Afrikë. Shigjetat e trasha tregojnë infeksionin me virusin e gripit nga egra
zogjtë te shpendët shtëpiak dhe anasjelltas.
Së pari, shtamet e ulëta patogjene që qarkullojnë në Siberi dhe Lindjen e Largët midis shpendëve të egër u prezantuan gjatë migrimeve të vjeshtës në vendet e Azisë Juglindore (Fig. 4). Pasi u bënë shumë patogjenë atje, ata depërtuan në Siberinë Perëndimore me zogj të egër në pranverën e vitit 2005 dhe u intensifikuan ndjeshëm gjatë periudhës së foleve. Llojet shumë patogjene janë shpërndarë me zogj në vendet e folezimit mbi 10 milionë hektarë.
km2. Pasi virusi goditi popullatën e shpendëve, ndodhi një shpërthim epizootik. Kjo është serioze dhe për një kohë të gjatë.
Parashikimi i tretë ishte se kur zogjtë të fluturojnë përsëri në zonat e tyre të dimrit nëpër zonat me popullsi të dendur të Rusisë dhe vendeve të tjera në vjeshtë, ata do të përhapin përsëri virusin.
BIOLOGJI DHE SHKENCA MJEKËSORE | Viruset e gripit: ngjarje dhe parashikime |
Dhe kështu ndodhi. Në vjeshtën e vitit 2005, virusi kishte arritur tashmë në shumicën e vendeve evropiane; ai u gjet gjithashtu në Turqi, Krime, Iran, Azerbajxhan, Gjeorgji, Indi dhe gjithashtu në Afrikë. Dhe arritëm në Tula, Kalmykia dhe deltën e Vollgës, ku një shpërthim i gripit në popullatën e mjellmave memec (Cygnusolor) u shfaq në dhjetor 2005 pas një ndalese të shkurtër fluturimi të rosave veriore - rosave me kreshtë (Aythya fuligula). Llojet e izoluara nga mjellmat, sipas analizës së tyre gjenetike molekulare, i përkasin gjithashtu grupit të viruseve Qinghai-Siberian Perëndimore. Për një gjysmë viti të qarkullimit midis shpendëve të egër, shtamet ruajtën gjenotipin e tyre dhe nuk humbën patogjenitetin e tyre të lartë.
Parashikimi i katërt është më alarmuesi. Virusi ka ndotur shumë rezervuarë në zonat e folezimit dhe në rrugët e migrimit dhe do të qëndrojë atje deri në pranverë. Çdo trup natyror i ujit ku kanë rënë feçet e zogjve të infektuar kthehet në një "bombë me sahat". Kjo mund të krahasohet me përfshirjen e tokave torfe në zjarrin e taigës. Në pranverë, zogjtë e infektuar dhe të shëndetshëm do të kthehen dhe do të fluturojnë nëpër këto "fusha të minuara", kështu që ngjarjet në verën e vitit 2006 mund të jenë shumë më të frikshme se në sezonin e kaluar. Kjo konfirmohet nga përkeqësimi si ortek i situatës në Evropë, Azi dhe Afrikë tashmë në mars. Kjo është panzootike. Dhe kur shtamet shumë patogjene që qarkullojnë midis shpendëve të egër në pranverë kthehen në shtame patogjene të ulëta, është e pamundur të parashikohet se sa do të zgjasë procesi i riorganizimit të tyre - muaj apo vite. Është e qartë se kjo është një temë studimi prioritare, nga e cila varet zhvillimi i ngjarjeve në të ardhmen e parashikueshme.
Sa i përket virusit pandemik, ai mund të lindë edhe tek ne pas infektimit të derrave me viruse të njeriut dhe të shpendëve. Por me shumë gjasa do të na vijë nga Kina, ku mundësitë për transformimin e reasorantit janë veçanërisht të mëdha, duke pasur parasysh aktivitetin e procesit epizootik dhe kontigjentin e madh të prekshëm midis popullatës. Një virus pandemik mund të shfaqet në vendin tonë në çdo moment - për këtë, mjafton vetëm një zëvendësim i aminoacideve në RCC të hemagglutininës, si rezultat, virusi do të fillojë të njohë receptorët e qelizave njerëzore dhe, në përputhje me rrethanat, do të fillojë të të transmetohet nga personi në person.
Se çfarë, nga këndvështrimi ynë, duhet bërë tani në nivel shtetëror, është formuluar në tabelë. Ne do t'i kushtojmë vëmendje të veçantë studimit të evolucionit të mëtejshëm të shtameve shumë patogjene që prekën popullatat e shpendëve të egër. Ekosistemet në territorin e Rusisë luajnë një rol kyç në këtë. Ne planifikojmë të vazhdojmë monitorimin në pjesën evropiane të vendit, në Siberi dhe Lindjen e Largët, dhe gjithashtu, ndoshta, në disa vende fqinje.
Në pesë vitet e fundit, hulumtimi ynë është kryer së bashku me gjuetarë, ornitologë, punonjës të shërbimeve federale të mbikëqyrjes fitoveterinare dhe sanitare dhe epidemiologjike të rajoneve Novosibirsk, Astrakhan, Irkutsk, Territorin Primorsky, Birobidzhan, republikat e Kalmykia dhe Buryati. . E gjithë kjo u zhvillua në kuadrin e programeve federale "Mbrojtja nga patogjenët", "Zhvillimi i mjeteve dhe metodave për të luftuar bioterrorizmin", "Gripi A i derrave dhe shpendëve: ndërveprimi i popullatave".
