مراحل و مکانیسم فرآیند عفونت و تولید مثل ویروس ها. ویروس آنفولانزا چگونه کار می کند: چرا ما بیمار می شویم؟ تکثیر ویروس آنفولانزا در آن رخ می دهد

خانواده ارتومیکسوویروس ها (به یونانی orthos - صحیح، tuha - mucus) شامل ویروس های آنفولانزا از انواع A، B، C است که مانند پارامیکسو ویروس ها میل ترکیبی به موسین دارند. ویروس آنفولانزای A انسان و برخی گونه های حیوانی (اسب، خوک و غیره) و پرندگان را آلوده می کند. ویروس های آنفلوانزا نوع B و C فقط برای انسان بیماری زا هستند. اولین ویروس آنفلوانزای انسانی در سال 1933 توسط دبلیو اسمیت، سی. اندروز و پی لیدو (سویه WS) با آلوده کردن موش‌های سفید از انسان جدا شد. بعداً این ویروس به نوع A اختصاص یافت. در سال 1940، T. Francis و T. Medgill ویروس آنفلوانزای نوع B و در سال 1949 R. Taylor - ویروس آنفلوانزای نوع C با تنوع آنتی ژنی خود را کشف کردند. ویروس های آنفولانزا به سه نوع A، B و C تقسیم می شوند. نوع A شامل چندین زیرگروه است که از نظر آنتی ژن با یکدیگر متفاوت هستند - هماگلوتینین و نورآمینیداز. طبق طبقه بندی WHO (1980)، ویروس های آنفلوانزای انسانی و حیوانی از نوع A به 13 زیر گروه آنتی ژنیک برای هماگلوتینین (H1-H13) و 10 برای نورآمینیداز (N1-N10) تقسیم می شوند. از این میان، ویروس های آنفلوانزای انسانی نوع A شامل سه هماگلوتینین (HI، H2 و H3) و دو نورآمینیداز (N1 و N2) می باشد.در ویروس نوع A، زیرگروه هماگلوتینین و نورآمینیداز در براکت ها نشان داده شده است. به عنوان مثال، ویروس آنفولانزای A: Khabarovsk/90/77 (H1N1).

ساختار و ترکیب شیمیایی

ویروس آنفولانزا شکل کروی دارد و قطر آن بین 80 تا 120 نانومتر است. فرم های رشته ای کمتر رایج هستند. نوکلئوکپسید مارپیچ یک رشته ریبونوکلئوپروتئین مارپیچ دوگانه (RNP) است که هسته ویریون را تشکیل می دهد. RNA پلیمراز و اندونوکلئازها (P1 و P3) با آن مرتبط هستند. هسته توسط غشایی متشکل از پروتئین M احاطه شده است که RNP را به لایه چربی دوگانه پوسته خارجی و فرآیندهای استیلوئیدی متشکل از هماگلوتینین و نورآمینیداز متصل می کند.ویریون ها حاوی حدود 1٪ RNA، 70٪ پروتئین، 24٪ لیپید هستند. و 5 درصد کربوهیدرات. لیپیدها و کربوهیدرات ها بخشی از لیپوپروتئین ها و گلیکوپروتئین های پوسته بیرونی هستند و منشا سلولی دارند. ژنوم ویروس توسط یک مولکول RNA تکه تکه شده با رشته منهای نشان داده می شود. ویروس های آنفولانزای نوع A و B دارای 8 قطعه RNA هستند که از این تعداد 5 قطعه هر کدام یک پروتئین و 3 مورد آخر هر کدام دو پروتئین را رمزگذاری می کنند.

آنتی ژن ها

ویروس های آنفولانزای A، B و C از نظر آنتی ژن نوع خاص مرتبط با RNP (پروتئین NP) و پروتئین ماتریکس M که ساختار ویریون را تثبیت می کند با یکدیگر متفاوت هستند.این آنتی ژن ها در CSC ها شناسایی می شوند. ویژگی باریک تر ویروس نوع A توسط دو آنتی ژن سطحی دیگر - هماگلوتینین H و نورآمینیداز N که با شماره سریال مشخص می شوند تعیین می شود.هماگلوتینین یک گلیکوپروتئین پیچیده با خواص محافظتی است. در بدن باعث ایجاد آنتی بادی های خنثی کننده ویروس - آنتی هماگلوتینین ها، شناسایی شده در RTGA می شود. تنوع هماگلوتینین (آنتی ژن H) رانش آنتی ژنی و جابجایی ویروس آنفولانزا را تعیین می کند. رانش آنتی ژنیک به عنوان تغییرات جزئی در آنتی ژن H در اثر جهش های نقطه ای در ژنی که تشکیل آن را کنترل می کند، درک می شود. چنین تغییراتی می تواند تحت تأثیر عوامل انتخابی مانند آنتی بادی ها در فرزندان جمع شود. این در نهایت منجر به یک تغییر کمی می شود که در تغییر خواص آنتی ژنی هماگلوتینین بیان می شود. با جابجایی آنتی ژنی، جایگزینی کامل ژن اتفاق می افتد که ممکن است بر اساس نوترکیبی بین دو ویروس باشد. این منجر به تغییر در زیرگروه هماگلوتینین یا نورآمینیداز و گاهی اوقات هر دو آنتی ژن و ظهور انواع آنتی ژنی جدید ویروس می شود که باعث اپیدمی ها و همه گیری های بزرگ می شود.هماگلوتینین همچنین گیرنده ای است که توسط آن ویروس بر روی سلول های حساس جذب می شود. از جمله گلبول های قرمز باعث چسبیدن آنها به هم می شود و در همولیز گلبول های قرمز نقش دارد نورآمینیداز ویروسی آنزیمی است که جدا شدن اسید سیالیک از بستر را کاتالیز می کند. خاصیت آنتی ژنی دارد و در عین حال در آزادسازی ویریون ها از سلول میزبان شرکت می کند. نورآمینیداز، مانند هماگلوتینین، در نتیجه رانش و شیفت آنتی ژنی تغییر می کند.

کشت و تولید مثل

ویروس آنفولانزا در جنین مرغ و در کشت سلولی کشت می شود. محیط بهینه جنین مرغ است که در حفره های آمنیوتیک و آلانتوئیک آنها ویروس به مدت 36-48 ساعت تکثیر می شود.حساس ترین آنها به ویروس آنفولانزا کشت های اولیه سلول های کلیه جنین انسان و برخی از حیوانات است. تولیدمثل ویروس در این فرهنگ ها با CPP خفیف همراه است که شبیه انحطاط خود به خود سلولی است. ویروس‌های آنفولانزا بر روی گیرنده‌های گلیکوپروتئینی سلول‌های اپیتلیال جذب می‌شوند که با اندوسیتوز گیرنده به داخل آن نفوذ می‌کنند. رونویسی و تکثیر ژنوم ویروس در هسته سلول انجام می شود. در این مورد، تک تک قطعات RNA خوانده شده به شکل mRNA به ریبوزوم ها ترجمه می شوند، جایی که پروتئین های ویژه ویروس سنتز می شوند. پس از تکثیر ژنوم ویروس، مخزن RNA ویروسی تشکیل می شود که در مونتاژ نوکلئوکپسیدهای جدید استفاده می شود.

پاتوژنز

تولید مثل اولیه ویروس در سلول های اپیتلیال دستگاه تنفسی رخ می دهد. از طریق سطح فرسایش یافته غشای مخاطی، ویروس وارد جریان خون می شود و باعث ویرمی می شود. گردش ویروس در خون با آسیب به سلول های اندوتلیال مویرگ های خون همراه است و در نتیجه نفوذپذیری آنها افزایش می یابد. در موارد شدید، خونریزی در ریه ها، عضله قلب و سایر اندام های داخلی مشاهده می شود. ویروس های آنفولانزا که وارد غدد لنفاوی می شوند، به لنفوسیت ها آسیب می رسانند و در نتیجه نقص ایمنی اکتسابی ایجاد می شود که به بروز عفونت های باکتریایی ثانویه کمک می کند.آنفولانزا باعث مسمومیت بدن با شدت های مختلف می شود.

مصونیت

مکانیسم ایمنی ضد آنفولانزا با عوامل طبیعی محافظت غیر اختصاصی ضد ویروسی، عمدتاً با تولید اینترفرون و سلول‌های کشنده طبیعی مرتبط است. ایمنی خاص توسط عوامل پاسخ سلولی و هومورال ایجاد می‌شود. اولی توسط ماکروفاژها و کشنده های T نشان داده می شود. دومی ایمونوگلوبولین ها، عمدتاً آنتی هماگلوتینین ها و آنتی بادی های ضد نورومینیداز هستند که دارای خواص خنثی کننده ویروس هستند. دومی، بر خلاف آنتی هماگلوتینین، فقط تا حدی ویروس آنفولانزا را خنثی می کند و از گسترش آن جلوگیری می کند. آنتی بادی های تثبیت کننده مکمل به نوکلئوپروتئین ویروسی خاصیت محافظتی ندارند و بعد از 1.5 ماه. از خون دوران نقاهت ناپدید می شود آنتی بادی ها 4-3 روز پس از شروع بیماری در سرم خون یافت می شوند و پس از 2-3 هفته به حداکثر عیار می رسند. مدت زمان ایمنی خاص به دست آمده پس از عفونت آنفولانزا، بر خلاف تصورات قبلی، در چندین دهه اندازه گیری می شود. این نتیجه بر اساس مطالعه ساختار سنی بروز آنفولانزای ناشی از ویروس A (H1N1) در سال 1977 به دست آمد. مشخص شد که این ویروس که از سال 1957 وجود نداشت، در سال 1977 تنها افرادی را تحت تأثیر قرار داد. بزرگتر از 20 سال. بنابراین، پس از ابتلا به عفونت آنفلوانزای ناشی از ویروس آنفولانزای نوع A، ایمنی شدیدی ایجاد می‌شود که کاملاً مختص به زیرگروه ویروس (توسط آنتی‌ژن‌های H و N) است که باعث تشکیل آن شده است. علاوه بر این، نوزادان تازه متولد شده دارای ایمنی غیرفعال ناشی از آنتی بادی های کلاس IgG در برابر زیرگروه ویروس مربوطه A هستند. ایمنی برای 6-8 ماه ادامه می یابد.

همهگیرشناسی

منبع عفونت افراد بیمار و ناقلان ویروس هستند. انتقال پاتوژن توسط قطرات معلق در هوا صورت می گیرد. آنفولانزا به عفونت های همه گیر اطلاق می شود که اغلب در ماه های زمستان و زمستان و بهار رخ می دهد. تقریباً هر ده سال یکبار، اپیدمی‌های آنفولانزا به شکل همه‌گیری ظاهر می‌شوند و جمعیت قاره‌های مختلف را پوشش می‌دهند. این به دلیل تغییر در آنتی ژن های H و N ویروس نوع A است که با رانش و شیفت آنتی ژنی همراه است. به عنوان مثال، ویروس آنفولانزای A با هماگلوتینین NSW1 باعث همه گیری آنفولانزای اسپانیایی در سال 1918 شد که جان 20 میلیون انسان را گرفت. در سال 1957، ویروس آنفولانزای "آسیایی" (H2N2) باعث بیماری همه گیر شد که بیش از 2 میلیارد نفر را تحت تاثیر قرار داد. در سال 1968، یک نوع بیماری همه گیر جدید ظاهر شد، ویروس آنفلوانزا A (H3N2) به نام "ویروس هنگ کنگ" که تا به امروز به گردش خود ادامه می دهد. در سال 1977، یک ویروس از نوع A (H1N1) به آن پیوست. در این رابطه، این فرضیه مطرح شد که انواع تغییر این ویروس از نظر تاریخی جدید نیستند. آنها زیرگونه‌های سروزی هستند که در سال‌های گذشته در گردش بوده‌اند. توقف گردش ویروس آنفولانزا که باعث اپیدمی دیگری شده است با ایمنی جمعی جمعیت که نسبت به این نوع آنتی ژنی پاتوژن ایجاد شده است توضیح داده می‌شود. در مقابل این پس زمینه، انتخاب انواع آنتی ژنی جدید رخ می دهد که مصونیت جمعی هنوز در برابر آن شکل نگرفته است. هنوز مشخص نیست که گونه های آنتی ژنی (سرو تیپ های) ویروس آنفلوانزا نوع A که در یک دوره تاریخی خاص گردش خون فعال را ترک کرده اند کجا هستند. برای مدت طولانی ذخیره می شوند. این احتمال وجود دارد که مخزن این گونه ویروس ها حیوانات وحشی و اهلی به ویژه پرندگان باشند که به گونه های انسانی ویروس آنفلوانزای A آلوده شده و آنها را برای مدت طولانی در گردش نگه می دارند. در همان زمان، نوترکیبی های ژنتیکی بین ویروس های پرندگان و انسانی در بدن پرندگان رخ می دهد که منجر به تشکیل انواع آنتی ژنی جدید می شود.طبق فرضیه دیگری، ویروس های آنفولانزا از همه زیرگروه های شناخته شده به طور مداوم در بین جمعیت در گردش هستند، اما از نظر اپیدمی مرتبط می شوند. تنها با کاهش ایمنی جمعی، ویروس های آنفلوانزای نوع B و C پایداری آنتی ژنی بالاتری دارند. ویروس های آنفولانزای نوع B باعث اپیدمی های با شدت کمتر و شیوع موضعی می شوند. ویروس آنفولانزا نوع C عامل بیماری های پراکنده است.ویروس آنفولانزا به سرعت توسط دمای بالای 56 درجه سانتی گراد، اشعه ماوراء بنفش، مواد ضدعفونی کننده، مواد شوینده از بین می رود. ماندگاری خود را به مدت 1 روز حفظ می کند. در دمای اتاق، روی سطوح صاف فلزی و پلاستیکی - تا 2 روز. ویروس های آنفلوانزا در دمای پایین (70- درجه سانتیگراد) زنده می مانند.

پروفیلاکسی اختصاصی

برای پیشگیری از آنفولانزا از ریمانتادین استفاده می شود که تولید مثل ویروس آنفولانزا نوع A را سرکوب می کند. برای پیشگیری غیرفعال از ایمونوگلوبولین ضد آنفلوانزای انسانی که از سرم خون اهداکنندگان واکسینه شده با واکسن آنفولانزا به دست می آید استفاده می شود. اینترفرون لکوسیت انسانی اثر خاصی دارد برای واکسیناسیون از واکسن های زنده و غیرفعال استفاده می شود. با معرفی واکسن های زنده، مصونیت عمومی و موضعی ایجاد می شود. علاوه بر این، القای اینترفرون ذکر شده است.در حال حاضر، واکسن های غیر فعال از انواع مختلف به دست آمده است: ویریون، زیر واحد، تقسیم و مخلوط. واکسن‌های ویریون از طریق خالص‌سازی باکیفیت ویروس‌های رشد یافته در جنین مرغ به دست می‌آیند. واکسن های زیر واحد آنتی ژن های سطحی خالص شده ویروس آنفولانزا - هماگلوتینین ها و نورآمینیداز هستند. چنین آماده سازی واکسن با واکنش زایی کم و ایمنی زایی بالا مشخص می شود. واکسن های بریده شده یا متلاشی شده از یک سوسپانسیون خالص شده از ویریون ها با درمان با مواد شوینده به دست می آیند. با این حال، هنوز هیچ اتفاق نظری در مورد مزایای هر یک از این واکسن ها وجود ندارد. واکسن‌های غیرفعال باعث ایجاد پاسخ ایمنی در سیستم ایمنی هومورال عمومی و موضعی می‌شوند، اما به میزان کمتری نسبت به واکسن‌های زنده باعث سنتز اینترفرون می‌شوند.تجربه سال‌ها در استفاده از واکسن‌های زنده و غیرفعال نشان می‌دهد که عدم تطابق آنتی ژنی سویه‌های واکسن. با سویه های اپیدمی اصلی، اما نه تنها دلیل اثربخشی کم واکسیناسیون آنفولانزا است. در سال های اخیر تلاش هایی برای ایجاد واکسن های دستکاری ژنتیکی و مصنوعی آنفولانزا صورت گرفته است.

آنفولانزا

آنفولانزا یک بیماری حاد تنفسی انسان است که تمایل به گسترش همه گیر دارد. با التهاب کاتارال دستگاه تنفسی فوقانی، تب، مسمومیت عمومی شدید مشخص می شود. آنفولانزا اغلب با بروز عوارض شدید همراه است - پنومونی باکتریایی ثانویه، تشدید بیماری های مزمن ریوی. پاتوژن های آنفولانزا متعلق به خانواده Orthomyxoviridae هستند. این شامل سه جنس ویروس است - A، B، C. ویروس آنفولانزا شکل کروی دارد، ابعاد آن 80-120 نانومتر است. گاهی اوقات ویریون های رشته ای تشکیل می شوند. ژنوم توسط یک رشته منفی تک رشته ای از RNA تشکیل می شود که از هشت قطعه تشکیل شده است و توسط یک کپسید پروتئینی احاطه شده است. RNA مرتبط با 4 پروتئین داخلی: نوکلئوپروتئین ها (NP) و پروتئین های با وزن مولکولی بالا PI، P2، P3 که در رونویسی ژنوم و تکثیر ویروس نقش دارند. نوکلئوکپسید دارای تقارن مارپیچ است. بالای غشای کپسید لایه ای از پروتئین ماتریکس (پروتئین M) قرار دارد. در غشای خارجی سوپر کپسید، هماگلوتینین (H) و نورآمینیداز (N) به شکل خارها قرار دارند. هر دو گلیکوپروتئین (N و H) خواص آنتی ژنی مشخصی دارند. در ویروس های آنفولانزا، 13 نوع آنتی ژنی مختلف هماگلوتینین (NI-13) و 10 نوع نورآمینیداز (N1-10) یافت شد.با توجه به آنتی ژن نوکلئوپروتئین داخلی، سه نوع ویروس آنفولانزا متمایز می شود - A، B، C، که را می توان در RSK تعیین کرد. ویروس‌های نوع A که انسان را آلوده می‌کنند دارای سه نوع هماگلوتینین (HI، H2، H3) و دو نوع نورآمینیداز (N1، N2) هستند. بسته به ترکیب آنها، انواعی از ویروس های آنفولانزای A وجود دارد - H1N1، H2N2، H3N2. آنها در واکنش مهار هماگلوتیناسیون با سرم های مربوطه تعیین می شوند.ویروس های آنفولانزا به راحتی در جنین مرغ و کشت های سلولی مختلف کشت می شوند. حداکثر تجمع ویروس ها پس از 2-3 روز رخ می دهد. در محیط خارجی، ویروس به سرعت از طریق خشک شدن قابلیت عفونت خود را از دست می دهد. در دمای پایین در یخچال به مدت یک هفته، در -70 درجه سانتیگراد - بسیار طولانی تر نگهداری می شود. گرمایش پس از چند دقیقه منجر به غیرفعال شدن آن می شود. تحت تأثیر اتر، فنل، فرمالین به سرعت فرو می ریزد.

روش تشخیص ویروس شناسی

سواب نازوفارنکس، ترشحات بینی گرفته شده با سواب پنبه استریل خشک یا مرطوب در روزهای اول بیماری، خلط به عنوان ماده برای تحقیق استفاده شد. ویروس ها را می توان در خون، مایع مغزی نخاعی یافت. در موارد کشنده تکه هایی از بافت های آسیب دیده مجاری تنفسی فوقانی و تحتانی، مغز و ... گرفته می شود.سواب نازوفارنکس با معده خالی گرفته می شود. بیمار باید گلو را سه بار با محلول نمک نمک استریل کلرید سدیم (15-10 میلی لیتر) شستشو دهد که در یک شیشه دهان گشاد استریل جمع آوری شده است. پس از آن، یک تکه پنبه استریل با دیواره پشتی حلق، مجرای بینی پاک می شود، سپس آن را در یک شیشه فرو می برند. با دیواره پشت گلو پاک می شود. پس از گرفتن مواد، سواب در یک لوله آزمایش با سالین فیزیولوژیکی غوطه ور می شود که 5 درصد سرم حیوانی غیرفعال شده به آن اضافه می شود. در آزمایشگاه، سواب ها در مایع شسته می شوند، روی دیواره لوله آزمایش فشرده می شوند و خارج می شوند. زهکش را برای ته نشین شدن در یخچال نگهداری می کنند، سپس قسمت میانی مایع را در لوله های آزمایش استریل می برند. آنتی بیوتیک های پنی سیلین (200-1000 واحد در میلی لیتر)، استرپتومایسین (200-500 میکروگرم بر میلی لیتر)، نیستاتین (100-1000 واحد در میلی لیتر) به مواد اضافه می شوند تا فلور میکروبی همراه را از بین ببرند، به مدت 30 دقیقه در دمای اتاق نگهداری می شوند و استفاده می شوند. برای جداسازی ویروس ها، که قبلاً آن را از نظر عقیمی بررسی کرده باشید. روشی حساس برای جداسازی ویروس های آلوده کننده جنین مرغ 10-11 روزه. مواد در حجم 0.1-0.2 میلی لیتر به داخل حفره آمنیوتیک یا آلانتویس تزریق می شود. به عنوان یک قاعده، 3-5 جنین را آلوده کنید. جنین ها در دمای بهینه 33-34 درجه سانتی گراد به مدت 72 ساعت انکوبه می شوند. به منظور افزایش تعداد ویریون ها در ماده آزمایش، آن را از قبل غلیظ می کنند. برای این کار از روش های جذب ویروس ها روی گلبول های قرمز مرغ، تیمار با محلول 2/0 درصد تریپسین برای افزایش خاصیت عفونی ویروس ها و یا رسوب دادن آنها با روش های خاص استفاده کنید.جنین های مرغ پس از انکوباسیون در دمای 4 درجه سرد می شوند. C به مدت 2-4 ساعت، سپس پیپت های استریل یا سرنگ آلانتویزنو یا مایع آمنیوتیک آسپیره کنید. در این، با کمک RHA، وجود یک ویروس عفونی مشخص می شود. برای انجام این کار، حجم مساوی (0.2 میلی لیتر) از مواد ویروسی و 1% سوسپانسیون گلبول های قرمز مرغ را مخلوط کنید. یک واکنش مثبت (وجود ویروس در ماده) با ته نشین شدن گلبول های قرمز به شکل چتر مشخص می شود.اگر ویروسی در ماده وجود داشته باشد که خاصیت هماگلوتیناسیون داشته باشد، با استفاده از یک RGA منبسط شده تیتر می شود و تعیین می شود. تیتر فعالیت هماگلوتیناسیون با کمک این واکنش، تیتر ویروس هماگلوتیناسیون مشخص می شود - بالاترین رقت ماده، که هنوز هم واکنش هماگلوتیناسیون را نشان می دهد. این مقدار ویروس به عنوان یک واحد هماگلوتیناسیون (HAU) در نظر گرفته می شود.

شناسایی ویروس های آنفولانزا با استفاده از RTGA

برای انجام این کار، ابتدا یک رقت کاری از ماده ویروسی تهیه کنید که حاوی 4 GAO از ویروس در یک حجم معین است.بررسی واکنش پس از تشکیل رسوب گلبول های قرمز در چاهک های کنترل انجام می شود. یک واکنش مثبت با تاخیر در هماگلوتیناسیون در چاهک های آزمایشی مشهود است.ویروس های آنفولانزا را می توان با استفاده از خطوط کشت سلولی مختلف جدا کرد - جنین انسان، کلیه میمون، خط سلولی پیوسته کلیه سگ سگ (MDCK) و غیره. در کشت های سلولی، اثر سیتوپاتیک ویروس ها آشکار می شود (ظاهر سلول ها با لبه های پوسته پوسته، واکوئل ها، تشکیل ادخال های داخل هسته ای و سیتوپلاسمی)، که با انحطاط تک لایه سلولی پایان می یابد. 1:8). علاوه بر این واکنش می توان از RGGads استفاده کرد، اما حساسیت کمتری دارد و به تیتر سرم ایمنی حداقل 1:160 و همچنین RSK، RN، PEMA و غیره نیاز دارد.

مطالعه سرولوژیکی

برای تأیید تشخیص آنفولانزا از آزمایش سرولوژیکی استفاده می شود. این بر اساس تعیین افزایش چهار برابری در تیتر آنتی بادی در سرم بیمار است. سرم اول در شروع بیماری در دوره حاد (2-5-1 روز بیماری) و دوم - بعد از 10-14 به دست می آید. روز بیماری از آنجایی که سرم ها را می توان به طور همزمان مصرف کرد، اولین آنها در یخچال در دمای -20 درجه سانتیگراد نگهداری می شود. RTGA، RSK، RNGA اغلب استفاده می شود. این واکنش‌ها با مجموعه‌های ویژه‌ای از کیت‌های تشخیص ویروسی استاندارد (سویه‌های مرجع ویروس آنفولانزا از انواع مختلف سرولوژیکی) تنظیم می‌شوند. از آنجایی که سرم بیماران ممکن است حاوی مهارکننده های غیر اختصاصی هماگلوتیناسیون باشد، ابتدا در دمای 56 درجه سانتیگراد حرارت داده می شود و همچنین با آنزیم خاصی (به عنوان مثال نورآمینیداز) یا محلول های پریودات پتاسیم، ریوانول، کلرید منگنز درمان می شود. سیستم تعلیق لاستیک سفید و غیره طبق طرح های خاص و

واکنش مهار هماگلوتیناسیون

واکنش مهار هماگلوتیناسیون را می توان در لوله های آزمایش (macroshtod) یا در صفحات ویژه برای مطالعات ایمونولوژیک قرار داد.این واکنش زمانی مثبت در نظر گرفته می شود که یک رسوب گلبول قرمز متراکم و فشرده با لبه های صاف تشکیل شود.

تشخیص سریع

این روش بر اساس تشخیص آنتی ژن های ویروسی خاص در مواد آزمایش با استفاده از ایمونوفلورسانس در RIF مستقیم یا غیرمستقیم است. مخاط از مجرای بینی یا دیواره خلفی حلق به دست می آید، سانتریفیوژ می شود و اسمیر از رسوب سلول های اپیتلیوم استوانه ای غشای مخاطی روی لام های شیشه ای تهیه می شود. آنها با سرم های ایمونوفلورسانس کونژوگه به ​​فلوروکروم ها، مانند FITC (فلورسئین ایزوتیوسیانات) درمان می شوند. هنگام بررسی آماده سازی با استفاده از میکروسکوپ شب تاب، درخشش مشخصی از ویروس های آنفولانزا به رنگ زرد مشاهده می شود که در شروع بیماری در هسته سلول های اپیتلیال موضعی می شوند. اخیراً استفاده از ELISA، RZNGA و PCR پیشنهاد شده است. برای نشان دادن آنتی ژن های ویروسی خاص.

فصل اپیدمی 2017-2018 در راه است. واکسیناتورها سرنگ ها را آماده می کنند، درمانگران فونندوسکوپ آماده می کنند، داروسازان «داروهای ضد آنفولانزا» را تهیه می کنند و مردم گزارش های رسانه ها را می خوانند و امیدوارند که با کمترین تلفات از یک حمله ویروسی فصلی دیگر جان سالم به در ببرند. طی سال‌ها توسعه فعال فضای اطلاعاتی، شهروندان قبلاً به نام‌های اسرارآمیز H1N1 یا H5N1 عادت کرده‌اند و برخی قبلاً می‌دانند که اولی آنفولانزای خوکی و دومی آنفولانزای پرندگان است. اما تاکنون، تعداد کمی از بیماران عادی - سابق و آینده - متوجه شده اند که ویروس آنفولانزا چگونه کار می کند و دقیقا چگونه کار می کند. MedAboutMe این شکاف را پر خواهد کرد.

ویروس آنفولانزا چگونه سازماندهی می شود؟

ویروس های آنفولانزا متعلق به یک خانواده جداگانه از ارتومیکسوویروس ها هستند. ژنوم آنها مانند انسان حاوی DNA دو رشته ای نیست، بلکه حاوی RNA تک رشته ای است. علاوه بر این، این زنجیره شامل 8 قطعه جداگانه است که به طور کلی تنها 11 پروتئین را کد می کند. قطعات RNA حتی تکثیر می شوند، یعنی مستقل از یکدیگر تکثیر می شوند. این نکته مهمی است که توضیح می‌دهد چرا ویروس‌های آنفولانزا به راحتی تغییر می‌کنند و گونه‌های جدیدی را تشکیل می‌دهند. اگر دو سویه مختلف از ویروس آنفولانزا به یک سلول نفوذ کنند، می‌توانند بخش‌های جداگانه‌ای از ژنوم را مبادله کنند و در نتیجه ویروس‌های جدیدی را ایجاد کنند که قبلاً وجود نداشتند.

شکل ویروس کروی است. در قلب این کره قطعاتی از یک رشته RNA وجود دارد که هر کدام با مجموعه ای از پروتئین ها مسئول تکثیر این قطعه خاص از ژنوم هستند، یعنی 8 نوکلئوپروتئین را نشان می دهند. تمام این نوکلئوپروتئین ها در یک نوکلئوکپسید، یک پوسته پروتئینی با ظرافت پیچیده شده اند. و در بالا - و این ویژگی خاص ویروس های به اصطلاح پوششی است - پوشش دیگری وجود دارد که به آن سوپر کپسید می گویند.

سوپر کپسید یک سازند بسیار مهم برای ویروس آنفولانزا است. در واقع، این یک غشای دولایه لیپیدی است که شامل انواع مختلفی از گلیکوپروتئین ها - مجتمع های پروتئین ها و کربوهیدرات ها است. دانشمندان با استفاده از گلیکوپروتئین ها تعیین می کنند که چه نوع سویه ای از ویروس آنفولانزا وارد لوله آزمایش آنها شده است. به لطف این ترکیبات است که ویروس وارد سلول شده و تکثیر می شود. و در نهایت، برخی از داروهای موثر علیه آنفولانزا در تماس با گلیکوپروتئین ها هستند.

چه ترکیبات منحصر به فردی را می توان در سطح سوپر کپسید ویروس آنفولانزا یافت؟

• هماگلوتینین

این ترکیبی است که با آن ویروس اولاً گیرنده های سلول های ارگانیسم میزبان را می شناسد و ثانیاً به آنها می چسبد. آنتی‌بادی‌های هماگلوتینین زمانی تشکیل می‌شوند که فرد مبتلا به سویه خاصی از ویروس آنفولانزا شود و در آینده در برابر آن محافظت کند. 16 زیرگروه هماگلوتینین وجود دارد.

• نورآمینیداز

این آنزیمی است که اولاً اجزای لایه محافظ مخاط را روی غشاهای مخاطی دستگاه تنفسی از بین می برد و در نتیجه عبور ویروس به سلول هدف را تسهیل می کند. دوم اینکه نورآمینیداز در ادغام ذره ویروسی با سلول نقش دارد. در نهایت، آزاد شدن ذرات ویروسی جدید از سلول آلوده را تضمین می کند. اگر نورآمینیداز وجود نداشت، چرخه تولید مثل فقط به یک سلول محدود می شد، حتی بدون هیچ علامتی از بیماری. آنتی بادی های نورآمینیداز در نتیجه واکسیناسیون در بدن ما تشکیل می شوند - آنها اجازه نمی دهند ویروس آنفولانزا در سراسر بدن پخش شود. 9 زیرگروه نورآمینیداز در ویروس های آنفولانزای A و هر یک در ویروس های آنفلوانزای B و C وجود دارد.

• پروتئین M2

این به اصطلاح کانال یونی است، یعنی یک "سوراخ" قابل تنظیم در غشای ویروس که از طریق آن یون ها می توانند حرکت کنند. از آنجایی که ما در مورد یون ها صحبت می کنیم، به این معنی است که ما در مورد بارهایی صحبت می کنیم که آنها حمل می کنند، یعنی زمانی که کانال یونی کار می کند، pH داخل ذره ویروسی تغییر می کند. پروتئین M2 برای انتقال پروتون ها، یعنی هسته های اتم هیدروژن که دارای بار مثبت (H +) هستند، در نظر گرفته شده است.

بنابراین، ویروس آنفولانزا، با کمک نورآمینیداز، راه خود را از طریق لایه مخاطی در دستگاه تنفسی باز کرد و به سطح سلول های اپیتلیال، به طور دقیق تر، به اپیتلیوم مژک دار که پوشش آنها را پوشانده بود، رسید. نورآمینیداز یک "جیب" ویژه دارد که با آن به بقایای کربوهیدرات های کوچک بیرون زده از غشای سلولی (الیگوساکاریدها) متصل می شود. در این حالت، سوپر کپسید ویروس با غشای سلولی تماس پیدا می کند و لایه های لیپیدی آن ها ادغام می شوند. در نتیجه، نوکلئوکپسید، همانطور که به یاد داریم، حاوی 8 بخش RNA است، وارد سلول، به سیتوپلاسم آن می شود.

در حالی که فرآیند نفوذ نوکلئوکپسید ویروس به داخل سلول در حال انجام است، پروتئین M2 به طور فعال در حال کار است. پروتون ها را به ویروس پمپاژ می کند، به این معنی که محیط داخل آن هر چه بیشتر اسیدی می شود. در نتیجه این دستکاری ها، محتویات نوکلئوکپسید به داخل هسته سلول نفوذ می کند. در همان زمان، بخش‌هایی از RNA ویروسی به شکل مجتمع‌هایی با پروتئین‌ها آزاد می‌شوند که تمام منابع لازم سلول را در اختیار خود دریافت می‌کنند و تولید ویروس‌های جدید را آغاز می‌کنند. این نیز یک فرآیند بسیار متفکرانه است که طی آن mRNA های "موقت" تشکیل می شوند و هسته را برای سیتوپلاسم باقی می گذارند تا سنتز پروتئین های ویروسی را در آنجا سازماندهی کند. سپس این پروتئین ها به هسته منتقل می شوند، جایی که در نهایت، تجمع ذرات ویروسی انجام می شود. بخشی از RNA ژنومی جدید برای تکثیر اضافی ژنوم ویروس استفاده می شود.

فقط می توان دقت جمع آوری 8 بخش مختلف RNA ویروسی را در یک ذره ویروسی آینده تحسین کرد. ورود دو بخش یکسان به یک نوکلئوکپسید غیرممکن است و مکانیسم این فرآیند هنوز ناشناخته است. در این لحظه، تشکیل ویروس‌های ترکیبی، که در بالا به آن پرداختیم، می‌تواند اتفاق بیفتد. در نهایت، نوکلئوکپسیدهای تمام شده به داخل سیتوپلاسم حرکت می کنند. هنگام عبور از غشای سلولی، نوکلئوکپسید تازه مونتاژ شده یک پوسته سوپر کپسید با کل مجموعه گلیکوپروتئین ها دریافت می کند.

کل چرخه از نفوذ ویروس به داخل سلول تا انتشار ذرات ویروسی جدید از آن بین 6 تا 8 ساعت طول می کشد. ویروس های متعددی بیرون می آیند و سلول های مجاور را آلوده می کنند. به ندرت، ویریون ها وارد جریان خون می شوند و در سراسر بدن پخش می شوند. انتشار ویروس از طریق بافت ها و اندام ها ویرمی نامیده می شود. اوج تکثیر ویروس آنفلوانزا در فاصله 24 تا 72 ساعت از لحظه ورود ذرات ویروسی به اپیتلیوم دستگاه تنفسی مشاهده می شود.

هنگامی که ویریون های جدید آزاد می شوند، سلول هایی که در آنها تکثیر شده اند می میرند. روند التهابی رخ می دهد. بنابراین، با آنفولانزا، دستگاه تنفسی فوقانی در درجه اول تحت تأثیر قرار می گیرد، به تدریج التهاب نای و برونش ها را می پوشاند. اگر ویروس ها وارد جریان خون شوند و در سراسر بدن پخش شوند، عفونت عمومیت می یابد، مسمومیت بدن ایجاد می شود.

خطر آنفولانزا در این واقعیت نهفته است که بر عروق خونی و سیستم عصبی تأثیر می گذارد. در پس زمینه عفونت با ویروس آنفولانزا، تشکیل گسترده ای از گونه های فعال اکسیژن (ROS) وجود دارد، یعنی رادیکال های آزاد که تمایل دارند هر چیزی را که در راه خود قرار می گیرد اکسید کنند.

باید درک کرد که ویروس آنفولانزا به خودی خود حاوی سموم نیست. اثر سمی توسط ترکیباتی اعمال می شود که بدن ما در تلاش برای محافظت از خود در برابر ویروس تولید می کند. این واکنش به قدری خشن است و مکان معرفی ویروس آنقدر "موفقیت آمیز" انتخاب می شود که فرد از سیستم ایمنی خود رنج می برد. طبق تحقیقات، ROS فرآیندهای پروتئولیز - تخریب پروتئین ها را آغاز می کند. این در مجاری هوایی در مرز با هوا رخ می دهد و در نتیجه یک انفجار "تنفسی" یا "متابولیک" ایجاد می شود.

از آنجایی که فرآیند معرفی و تولید مثل ویروس در دستگاه تنفسی انجام می شود، دیواره های مویرگ های واقع در آنجا (رگ های خونی کوچک) اول از همه آسیب می بینند. آنها شکننده تر، نفوذپذیرتر می شوند، که در موارد شدید منجر به اختلال در گردش خون موضعی، ایجاد سندرم هموراژیک و تهدید ادم ریوی می شود. در پس زمینه آسیب به سیستم عروقی، خون رسانی به مغز ممکن است بدتر شود و در نتیجه یک سندرم عصبی تشکیل می شود.

سیستم ایمنی در این زمان تولید مقدار زیادی سیتوکین را فعال می کند - موادی که باعث واکنش های التهابی می شوند و اثر سیتوتوکسیک دارند. به طور معمول، آنها باید در غیر فعال کردن و از بین بردن عوامل عفونی مشغول باشند. اما مقیاس این فرآیند به حدی است که یک پاسخ التهابی سیستمیک ایجاد می شود.

در نتیجه، به دلیل آسیب به غشای مخاطی دستگاه تنفسی و رگ های خونی، توانایی سیستم ایمنی برای مقاومت در برابر تهدیدات خارجی کاهش می یابد و فعالیت سلول های خونی محافظ نوتروفیل ها کاهش می یابد. به طور کلی، این منجر به فعال شدن بیماری های مزمن موجود و افزایش خطر عفونت باکتریایی می شود. شدیدترین و شایع ترین عارضه آنفولانزا، ذات الریه است.

گونه های مختلف آنفولانزا با یکدیگر متفاوت هستند، به ویژه، توانایی فعال کردن تولید انبوه ROS. بنابراین، برخی از انواع آنفولانزا شدیدتر هستند، در حالی که برخی دیگر آسان تر هستند. تا حد زیادی وضعیت بدن بیمار، وضعیت ایمنی او، تجربه آشنایی با سویه های دیگر نقش دارد. برخی از انواع آنفولانزا برای افراد مسن و کودکان خطرناک‌تر هستند، در حالی که برخی دیگر اغلب بر جمعیت در دوران اولیه تأثیر می‌گذارند.

برای توقف فرآیند تکثیر ویروس در سلول‌ها و انتشار آن در سراسر بدن، به موادی نیاز است که می‌توانند چرخه تولیدمثل آن را که با تکامل بهبود یافته است، قطع کنند.

در سال 1961، دانشمندان پیشنهاد کردند که با آمانتادین با ویروس های آنفولانزا مبارزه کنند. این ترکیب در سال 1966 مورد تایید قرار گرفت و در سال 1993 ریمانتادین، آنالوگ آن ظاهر شد. آمانتادین (و ریمانتادین) می توانند کانال های یونی پروتئین M2 را مسدود کنند. این کار تکثیر ویروس را در مراحل اولیه متوقف می کند.

این دارو در برابر ویروس های گروه A بسیار موثر بود، اما هیچ تاثیری بر ویروس های گروه B و C نداشت. و در سال 2006، مرکز کنترل و پیشگیری از بیماری های ایالات متحده (CDC) داده هایی را در مورد مقاومت (مقاومت) بسیار بالا برخی از سویه های ویروس منتشر کرد. به آدامانتان، تا 90٪ می رسد. علت آن جهش های نقطه ای در ژنوم ویروس بود که در طول درمان با آدامانتان رخ داد. بنابراین امروزه ریمانتادین و سایر آنالوگ های آن از داروهای بی اثر محسوب می شوند. علاوه بر این، آنها در ابتدا در برابر ویروس های گروه B و C بی فایده بودند.

در سال 1983، مهارکننده‌های نورآمینیداز ساخته شدند - موادی که توانایی آنزیم را برای تحریک آزادسازی ویریون‌های جدید از یک سلول آلوده مسدود می‌کنند. این به شما امکان می دهد تکثیر و انتشار ویروس را متوقف کنید.

مهارکننده های نورآمینیداز شامل اوسلتامیویر (تامیفلو) و زانامیویر (رلنزا) هستند. از سال 2009، داروی داخل وریدی دیگری از این گروه، پارامیویر، برای استفاده در ایالات متحده تایید شده است. این داروها در واقع تنها داروهایی هستند که به طور خاص برای مبارزه با ویروس آنفولانزا طراحی شده اند. اما باید ظرف 24-48 ساعت از اولین تظاهرات بیماری مصرف شوند. بعداً آنها بی اثر خواهند شد - ویروس های جدید متعددی از قبل در سراسر بدن پخش می شوند.

تمام عوامل به اصطلاح ضد ویروسی دیگر هیچ تأثیری بر خود ویروس آنفولانزا یا مراحل جداگانه نفوذ آن به بدن، تولید مثل و انتشار ندارند.

• ویروس آنفولانزا ساختاری است که توسط طبیعت برای نفوذ به بدن از طریق دستگاه تنفسی طراحی شده و مجهز به تمام "کلیدهای اصلی" لازم برای این کار است.
• تنها چند نوع دارو وجود دارد که به طور خاص بر روی ویروس آنفولانزا اثر می‌گذارند و ویژگی‌های چرخه زندگی و ساختار آن را در نظر می‌گیرند. اما یکی از این داروها در حال حاضر بی اثر است، زیرا ویروس با آن سازگار شده است. و انواع دیگر داروها فقط برای یک دوره بسیار کوتاه پس از شروع اولین علائم موثر هستند. اثر ضد آنفلوانزای سایر داروها ثابت نشده است.
• بنابراین برای درمان آنفولانزا از درمان علامتی و نظارت بر وضعیت بیمار استفاده می شود. در بیشتر موارد، با آنفولانزا، کافی است به سادگی در خانه دراز بکشید، داروهایی برای کاهش درجه حرارت بالا در صورتی که به 39 درجه سانتیگراد رسیده است، مصرف کنید و سایر روشها را برای کاهش وضعیت بیمار مصرف کنید. مهم است که از ایجاد عوارض جلوگیری کنید - برای این کار فقط باید تمام شرایط را برای بدن برای مبارزه با ویروس ایجاد کنید.
• واکسیناسیون بهترین راه برای مبارزه با ویروس است. حتی اگر فردی علیه یک سویه واکسینه شده باشد و سویه دیگری را دریافت کرده باشد، آنتی‌بادی‌های موجود می‌توانند حداقل محافظت را داشته باشند و روند بیماری را تسهیل کنند.

امتحان بده بسیاری از مردم آنفولانزا و عفونت های حاد تنفسی را با هم اشتباه می گیرند و در نتیجه درمان نادرست می شوند. پس از گذراندن این آزمون، می توانید یکی را از دیگری تشخیص دهید.

اپلیکیشن آنفولانزا و واکسیناسیون را دانلود کنید

K. SCHOLTISSEK و H.-D. KLENK (CH. SCHOLTISSEK, H.-D. KLENK)

مقدمه

تعدادی بررسی در مورد مشکل تکثیر ویروس آنفولانزا وجود دارد. ادبیات قبل از 1968 در Hoyle (1968) و Scholtissek (1969) خلاصه شده است؛ بررسی های جدیدتر عبارتند از White (1973) و Compans and Choppin (1974).

بیشتر داده ها در مورد تکثیر از مطالعه ویروس آنفولانزای نوع A به دست آمده است.

چندین سیستم کشت سلولی مناسب برای مطالعه تکثیر، مانند انتشار سویه WSN ویروس آنفولانزا در سلول‌های MDBK (چاپین، 1969) یا انتشار ویروس دیستمپر پرنده (FPV) در سلول‌های فیبروبلاست جنین جوجه، رایج شده‌اند. نمونه ای از منحنی رشد آخرین ویروس در یک چرخه منفرد در 30 ثابت شده است، که در آن دوره نهفتگی تقریباً 3 ساعت است و تولید ویروس به سطحی بین 8 تا 12 ساعت می رسد. بنابراین، چنین سیستم هایی برای مطالعات بیوشیمیایی بسیار مناسب هستند.

II. جذب، نفوذ، "راه راه" کردن ویروس

عفونت یک سلول با ویروس با جذب، یعنی اتصال یک ذره ویروسی به سطح سلول آغاز می شود. اتصال به دو ساختار مکمل نیاز دارد، یعنی: جایگاه‌های گیرنده روی سطح سلول و یک جزء ویروسی که مسئول شناسایی این مکان‌های گیرنده است. توانایی ویروس آنفولانزا در تعامل با گلبول‌های قرمز با منشاء مختلف و چسباندن آنها برای سال‌ها شناخته شده است (هیرست، 1941؛ McClelland، Hare، 1941) هماگلوتیناسیون به عنوان یک پاسخ مدل برای برهمکنش ویروس آنفولانزا با سطح سلول استفاده شده است، و "بیشتر دانش شما از این پدیده از چنین مطالعاتی ناشی می شود. با این حال، باید در تعمیم ها بسیار مراقب بود، زیرا ساختار سطح گلبول های قرمز و سطوح سلول های آلوده می تواند کاملاً متفاوت باشد (همچنین به فصل 3 مراجعه کنید).

الف. نقش هماگلوتینین در جذب

جزء ویریون درگیر در اتصال، سنبله HA* است. نقش پروتئین های β ویروسی در شروع عفونت با استفاده از آنتی بادی های اختصاصی برای دو پروتئین سطحی: HA* و NA* مورد مطالعه قرار گرفته است. این آنتی بادی ها را می توان با استفاده از ویروس های نوترکیب به دست آورد. برای مثال، تلاقی بین ویروس‌های AO و A2 منجر به تشکیل نوترکیب X7F1 می‌شود که حامل HA*، AO و NA* A2 است (Kilbourne et al., 1968). آنتی سرم علیه ویروس X7F1 NA* ویروس های آنفلوانزای نوع AO را مهار نمی کند، اما هماگلوتیناسیون را مهار می کند و عفونی بودن این نوع ویروس ها را خنثی می کند. تعامل همان سرم با ویروس های آنفلوانزای A2 هماگلوتیناسیون یا عفونت را مهار نمی کند، اگرچه خنثی سازی فعالیت NA* کامل است. بنابراین، NA* در فرآیند شروع عفونت دخالتی ندارد و به نظر می‌رسد که تنها NA* مسئول جذب است. این مفهوم با شواهدی تأیید می‌شود که ذرات ویروسی که فقط سنبله‌های نورآمینیداز از آن‌ها توسط آنزیم‌های پروتئولیتیک حذف شده‌اند، عفونی باقی مانده‌اند (Schulze, 1970).

شواهدی وجود دارد که نشان می‌دهد قسمت هماگلوتینه‌کننده در قسمت بیرونی "سنبله" HA*، غنی از کربوهیدرات‌ها قرار دارد (به فصل 3 مراجعه کنید). به نظر می رسد کربوهیدرات ها برای عملکرد HA* ضروری هستند، زیرا پروتئین های HA* غیر گلیکوزیله قادر به اتصال به گلبول های قرمز نیستند (Klenk et al., 1972b).

ب. گیرنده ویروس آنفلوانزا

کربوهیدرات ها یک عنصر ضروری (نه تنها از هماگلوتیشین، بلکه از گیرنده های ویروسی در سطح سلول هستند. هیرس (1942) مشاهده کرد که مجموعه ویروس-گلبول قرمز ناپایدار است و گیرنده روی سطح سلول توسط آنزیم از بین می رود. ویروس همانطور که بعدا نشان داده شد، این آنزیم نورآمینیداز است که اسید نوراشیک را از گلیکوپروتئین ها جدا می کند (Klenk et al., 1955; Klenk, Stoffel, 1956; Gottschalk, 1957). این اولین نمایش آنزیمی بود که جزء جدایی ناپذیر است. از یک ذره ویروسی.، 1947. بنابراین، مشخص شد که گیرنده ویروس آنفولانزا یک گلیکوپروتئین حاوی اسید نورآمینیک است.

از آن زمان، اطلاعات زیادی جمع آوری شده است

در مورد گیرنده میکسوویروس، که اخیراً در یک بررسی خلاصه شده است

هیوز (1973). به طور خلاصه، داده های به دست آمده به موارد زیر کاهش می یابد

دمیدن مکان های گیرنده حاوی بقایای نورومیو

اسید ioic که در زنجیره های کربوهیدرات وجود دارد

گلیکوپروتئین ها باقی مانده های انتهایی غیر اکسید کننده نورام ها

noznla برای تعامل گلیکوپروتئین ها با vi ضروری است

ویروس آنفولانزا. درمان با نورآمینیداز به طور کامل حذف می شود

فعالیت الزام آور مطالعات تخریب با

استفاده از periodat پیشنهاد می کند که برای پیوند

فعالیت به یک مولکول نورآمینیک دست نخورده نیاز دارد

اسیدها (سوتاجیت و وینزلر، 1971). گروه کربوکسیل،

احتمالاً نقش مهمی نیز ایفا می کند، زیرا لازم است،

ظاهراً همچنین نیروهای الکترواستاتیکی (هوانگ، 1974).

به نظر می رسد که فقط یک ویژه ضعیف وجود دارد

ویژگی با توجه به ساختاری که با آن مرتبط است

اسید نورآمینیک، زیرا، همانطور که نشان داده شد، کل

مجموعه ای از گلیکوپروتئین های حاوی یایرامیک اسید،

مرتبط با میکسوویروس ها علاوه بر این، گانگلیوزیدها (gli-

در این زمینه فعال هستند (هایوود، 1975).

می توان امیدوار بود که موضوع اتصال ویروس آنفولانزا پس از ایجاد ساختار مولکولی گیرنده واضح تر شود. تا حدودی، این قبلاً در مورد گلبول های قرمز به دست آمده است (Marchesi et al., 1973). همچنین ممکن است با مطالعه اتصال میکسوویروس ها به غشاهای مصنوعی اطلاعات بیشتری ارائه شود (تیفانی و بلو، 1971).

ج. مکانیسم های احتمالی نفوذ و "راه راه"

دو مکانیسم متفاوت برای نفوذ و حذف نه تنها ویروس آنفولانزا، بلکه به طور کلی ویروس‌ها نیز پیشنهاد شده است. اعتقاد بر این است که فرآیند ppnocytosis زمانی است که ذرات ویروسی در پینوزوم‌ها قرار می‌گیرند، که متعاقباً با لیزوزوم‌ها ادغام می‌شوند و آنزیم‌های لیزوزوم‌ها باعث می‌شوند که ویروس «لخت» شود (Fazekas de St. Grot, 1948) تأیید میکروسکوپی الکترونی این نقطه دیدگاه در آثار Dales و Choppin (1962) و Dourmashkin و Tyrrell (1970) به دست آمد. در 10 دقیقه پس از عفونت، ذرات ویروسی در تماس مستقیم با سطح سلول مشاهده شدند و تا 20 دقیقه ذرات در داخل واکوئل های سیتوپلاسمی یافت شدند. بر خلاف این مطالعه، مورگان و رز (1968) پیشنهاد کردند که ورود ممکن است به دلیل ادغام پوشش ویروسی با غشای سلول میزبان باشد. بنابراین، در حال حاضر هیچ اتفاق نظری در مورد مکانیسم نفوذ ویروس آنفلوانزا وجود ندارد.

همانطور که در فصل توضیح داده شد. 5، ویریون‌های ویروس آنفولانزا حاوی RNA پلیمراز مرتبط با اجزای ریبونوکلئوپروتئین آن‌ها هستند. بنابراین بعید است که فرآیند "برهنه کردن" از فرآیند آزادسازی ریبونوکلئولروتئین از نظر مکانی جدا شود. و این مرحله بر اساس مکانیسم سلول روی سطح سلول رخ می دهد. همجوشی غشایی، و در وزیکول های فاگوسیتیک، با توجه به مکانیسم virohexis.

III. رونویسی A. توالی سنتز RNA

RNA پلیمراز وارد شده با ذره آلوده کننده باید در مرحله اول تولید مثل ویروس عمل کند (به فصل 5 مراجعه کنید). ژنوم ویروس آنفولانزا را می توان از ویریون ها فقط به شکل جدا کرد

قطعات منفرد (نگاه کنید به فصل 6). علاوه بر این، همانطور که با تجزیه و تحلیل ژنتیکی (om. Ch. 7) و غیرفعال سازی مرحله ای ویروس عفونی نشان داده شد، به شکل قطعات جداگانه عمل می کند (Scholtissek, Rott, 1964). در این رابطه باید فرض کرد که - پلیمراز سنتز RNA را در هر قطعه جداگانه آغاز می کند از آنجایی که RNA به عنوان یک مولکول آزاد در سلول وجود ندارد، اما همیشه با یک پروتئین پوشانده شده است، این سوال مطرح می شود: RNA ویروسی در طول همانندسازی با چه پروتئینی مرتبط است؟

آزمایش‌هایی که بر روی سنتز RNA ویروس آنفولانزا انجام شده است، مشکلات زیادی را ایجاد می‌کند، زیرا اکتینومایسین D نمی‌تواند برای تشخیص تولید RNA ویروسی با مهار خاصی از سنتز RNA سلولی استفاده شود، زیرا این آنتی‌بیوتیک تولید مثل ویروس آنفولانزا را مهار می‌کند (Barry et al., 1962; روت و شولتیسک، 1964؛ بری و همکاران، 1965؛ پونز، 1967). به همین دلیل، برای تعیین توالی سنتز RNA در طول زمان، هیبریداسیون اختصاصی RNA نشاندار شده با پالس در نقاط مختلف پس از عفونت با مقدار اضافی vRNA یا ecRNA نشاندار نشده، و به دنبال آن درمان با RNase مورد استفاده قرار گرفت (Scholtissek and Rott, 1970). . در مراحل اولیه چرخه عفونی، سنتز ecRNA غالب شد و حدود 2 ساعت پس از عفونت به حداکثر رسید، در حالی که در مراحل بعدی بیشتر RNA اختصاصی ویروس تولید شده vRNA بود. Krug (1972)، با استفاده از روشی متفاوت، همچنین نشان داد که 4 ساعت پس از عفونت، سنتز BIKPHK تقریباً به طور کامل متوقف می شود. پس از استخراج با فنل، مقدار نسبتاً کمی از lncRNA یافت می شود (Scholtissek and Rott, 1970).

با توجه به این که یک نوع RNA ویروسی اطلاعاتی دارد1!! عمل می کند و به عنوان الگویی برای سنتز پروتئین های ویروسی استفاده می شود (به بخش IVA مراجعه کنید)، ممکن است کنترل ترجمه ای در سطح کاتابولیسم RNA ویروسی متفاوت وجود داشته باشد. بنابراین، آزمایش‌های تعقیب پالس برای مطالعه پایداری RNA ویروس آنفولانزا در داخل بدن انجام شد. مشخص شده است که بر خلاف RNA سلولی، هر دو نوع RNA ویروسی در طول دوره 90 دقیقه ای چنزا کاملاً پایدار هستند (Scholtissek et al., 1972).

پیش از این، هنگام مطالعه سنتز RNA ویروسی در داخل بدن، زمانی که اکتینومایسین D در مراحل پایانی چرخه عفونی اضافه شد (دوزبرگ و رابینسون، 1967؛ نایاک، 1970؛ ما-هی، 1970)، در نظر گرفته نشد که آنتی بیوتیک به طور خاص سنتز RNA مکمل را در داخل بدن مهار می کند (Scholtissek and Rott, 1970; Pons, 1973). از آنجایی که lncRNA از سلول های آلوده حداقل به عنوان پنج قطعه مجزا جدا می شود، نتیجه گیری شد که RNA ویروسی نیز به صورت قطعات سنتز می شود (Pons and Hirst, 1968).

ب. محلی سازی سنتز RNA ویروسی در داخل سلول میزبان

از داده‌های به‌دست‌آمده توسط اتورادیوگرافی، به این نتیجه رسیدیم که محل سنتز RNA ویروسی، ظاهراً هسته‌های سلولی است (Scholtissek et al., 1962; Barry et al., 1974). از آنجایی که دوره‌های پالس مورد استفاده در این مطالعات هنوز خیلی طولانی بود، نمی‌توان رد کرد که RNA ویروسی در سیتوپلاسم سلول سنتز شده و سپس به هسته‌هایی منتقل می‌شود که می‌تواند انباشته شود. علاوه بر این، vRNA و scRNA را می توان در یک سلول در مکان های مختلف سنتز کرد.

C. مهار سنتز RNA ویروسی 1. Actimomycin D، Mithramycin و α-amanitin

هنگامی که اکتینومایسین D یا میترامایسین، که با عملکرد الگوی DNA تداخل دارند، در زمانی که RNA یوپلیمراز وابسته به RNA ویروسی از قبل وجود دارد (مثلاً 2 ساعت پس از عفونت) به سلول‌های آلوده اضافه می‌شود (به عنوان مثال، 2 ساعت پس از عفونت)، سنتز vRNA حدود 2 ساعت ادامه می‌یابد. با این حال، تولید scRNA بلافاصله متوقف می شود. بعداً، سنتز vRNA نیز کاهش می‌یابد، که نشان می‌دهد به تولید مداوم scRNA نیاز دارد (Rott et al., 1965; Scholtissek and Rott, 1970; Scholtissek et al., 1970; Pons, 1973). گرگوریادس (1970) نشان داد که اکتینومایسین D نیز اثر قوی بر سنتز vRNA دارد که در اواخر چرخه عفونی اضافه شود. در این آزمایش‌ها، سنتز RNA ویروسی با افزایش ادغام یوریدین نشان‌دار به RNA کل سلول‌های آلوده تعیین شد. این افزایش را می توان با افزودن اکتینومایسین D از بین برد. با این حال، باید در نظر داشت که عفونت ویروس آنفلوآنزا باعث افزایش ادغام یوریدین نشاندار شده در سلول پس از عفونت می شود (Scholtissek et al., 1967) و اکتینومایسین D. یک اثر بازدارنده بر این ادغام دارد (Scholtissek et al., 1969). siAmanitin که هیچ تمایلی به DNA ندارد، بر فعالیت یکی از RNA پلیمرازهای سلولی (RNA podimerase II) تأثیر می‌گذارد، همچنین از سنتز escRNA هنگامی که بلافاصله پس از عفونت به مایع کشت اضافه می‌شود، جلوگیری می‌کند (Rott and Scholtissek, 1970; Mahy et al. .، 1972).

مکانیسمی که این آنتی‌بیوتیک‌ها به‌طور خاص سنتز ssRNA را مهار می‌کنند کاملاً شناخته نشده است، زیرا آنها با تشکیل ssRNA در شرایط آزمایشگاهی تداخل ندارند. ساعت پس از عفونت، اکتینومایسین D اضافه شد (Scholtissek and Rott, 1969a).

تولید مثل "ویروس های آنفولانزا را می توان با سایر اقدامات روی DNA سلول میزبان سرکوب کرد - معرفی میتومسین C، پیش تیمار با اشعه ماوراء بنفش یا حذف هسته های سلولی قبل از عفونت (بری، 1964؛ روت و همکاران، 1965؛ نایاک. راسموسن، 1966؛ فول لت و همکاران، 1974؛ کلی و همکاران، 1974). مکانیسمی که از طریق آن این اثرات بر تکثیر ویروس آنفولانزا تأثیر می‌گذارد ممکن است "مانند سایر آنتی‌بیوتیک‌ها باشد. تنها پیشنهادی" که از این مطالعات می‌توان ارائه کرد این است که نیاز به هسته‌های سلولی فعال "عملکردی" و (یا) در عملکرد سلولی وابسته به DNA برای تولید مثل ویروس های آنفولانزا. نمی توان گفت که این کارکردها چیست.

2. سیکلوهگزیماید

هنگامی که سیکلوهگزیماید، که به طور خاص سنتز پروتئین در سلول های حیوانی را مهار می کند، اضافه می شود، 2 ساعت پس از عفونت با ویروس آنفولانزا، تشکیل vRNA بلافاصله متوقف می شود، در حالی که تشکیل vzhRNA حداقل برای 2 ساعت ادامه دارد (Scholtissek and Rott, 1970; پونز، 1973). هنوز مشخص نیست که آیا سنتز مداوم یک پروتئین ویروسی یا سلولی که به‌عنوان «کیفیت/کوفاکتور برای پلیمراز سنتز کننده vRNA» استفاده می‌شود، ضروری است یا اینکه مقداری «پروتئین (مثلاً پروتئین NP) برای تثبیت پروتئین ضروری است. vRNA تازه سنتز شده یا سرکوب سنتز یک پروتئین ویروسی خاص منجر به تشکیل مداوم ecRNA می شود که سنتز آن معمولاً 3 ساعت پس از عفونت خاموش می شود. این خاموش شدن ممکن است برای شروع سنتز vRNA ضروری باشد. مطالعات با جهش یافته های حساس به دما باید به برخی از این سؤالات پاسخ دهد.

آزمایشات بین و سیمپسون (1973) نشان داد که رونویسی اولیه in vivo (سنتز ecRNA بر روی قالب mRNA با استفاده از پلیمراز ذره آلوده کننده) توسط سیکلوهگزیماید سرکوب نمی شود، در حالی که اکتینومایسین D رونویسی را کاملاً سرکوب می کند. بنابراین، سیکلوهگزیماید در داخل بدن بر فعالیت پلیمراز وارد شده با ذره آلوده کننده و سنتز ecRNA تأثیر نمی گذارد، اما از سنتز پلیمراز جدید لازم برای تولید ecRNA جلوگیری می کند.

3. گلوکوزامین

شناخته شده است که گلوکزامین با تولید UTP-]M-acetylglucosamine، مخزن UTP را در سلول های جنین جوجه تخلیه می کند (Scholtissek, 1971). هنگامی که محلول ارل حاوی گلوکز به عنوان محیط کشت استفاده می شود، آن را

فقط بر سنتز گلیکوپروتئین های ویروسی تأثیر می گذارد (به بخش V مراجعه کنید). با این حال، اگر گلوکز به‌عنوان منبع انرژی با لیرووات یا فوکوز جایگزین شود، در این صورت تخلیه UTP توسط این قندهای آمینه تقریباً 10 برابر بیشتر اتفاق می‌افتد. تحت این شرایط، مخزن UTP سلول میزبان به یک محدود کننده خاص در سرعت سنتز vRNA تبدیل می شود، در حالی که سنتز (RNA سلولی) هنوز تحت تأثیر قرار نگرفته است (Scholtissek, 1975). در نتیجه سرکوب سنتز RNA ویروسی ، تشکیل پروتئین های ویروسی نیز وجود ندارد.

این داده ها را می توان به دو صورت تفسیر کرد: یا RNA پلیمراز وابسته به RNA ویروسی نسبت به پلیمرازهای وابسته به DNA سلولی و RIC میل ترکیبی کمی برای UTP دارد، یا دو مخزن کم و بیش مستقل از UTP در سلول وجود دارد. که می تواند برای سنتز RNA ویروسی مورد استفاده قرار گیرد و بیشتر از سایر استخرها تحت تأثیر گلوکزامین است که می تواند به عنوان سوبسترا توسط RNA پلیمرازها استفاده شود.

D. سنتز RNA ویروسی در شرایط آزمایشگاهی

در سلول‌های آلوده به ویروس آنفولانزا، چندین محقق RNA پلیمراز وابسته به RNA را یافته‌اند (Ho, Walters, 1966; Scholtissek, Rott, 1969a; Skehel, Burke, 1969؛ Ruck et al., 1969؛ Mahy, Bromley, 1970؛ Compans. ، کالیگویری، 1973). بیشتر فعالیت آنزیم در بخش میکروزومی سلول های آلوده یافت می شود. در سیستم آزمایشگاهی، این فعالیت توسط RNase حذف می شود، اما نه توسط DNase. این به این معنی است که الگوی داخلی RNA است. واکنش نیاز به حضور هر چهار نوکلئوزیدی تری فسفات دارد و به اکتینوم-ایسین D حساس است. بیشتر تولید واکنش در شرایط آزمایشگاهی دارای وزن مولکولی نسبی کم است. داده‌های Horisberger و Guskey (1973) نشان می‌دهد که دو فعالیت آنزیمی متفاوت در سیتوپلاسم وجود دارد: یکی وابسته به Mg++ است و با غلظت‌های نسبتاً بالای نمک مهار می‌شود، دیگری وابسته به Mn++ و مقاوم‌تر به نمک‌ها است. آخرین فعالیت آنزیم نیز در داخل ذره ویروسی یافت می شود (به فصل 5 مراجعه کنید).

نتایج متناقضی با توجه به محصول آنزیم سیتوپلاسمی در سیستم آزمایشگاهی به دست آمده است. راک ■ و همکاران. (1969) گزارش کردند که در دستان آنها این آنزیم حداقل "برخی از RNAهای نوع ویریون (از 14 تا 19S) را سنتز می کند. نویسندگان هنگام تعیین ترکیب پایه محصول در یک سیستم آزمایشگاهی پس از انکوباسیون به این نتیجه رسیدند. بخش میکروزومی با هر چهار تری فسفات نوکلئوزیدی نشاندار شده با رادیواکتیویته خاص شناخته شده است.

اسید آدنیلیک همسایگان به‌دست‌آمده در همان کار با استفاده از [(a-32P]ATP) با داده‌های تجزیه و تحلیل نزدیک‌ترین همسایه به‌دست‌آمده توسط Scholtissek (1969)، که نتیجه‌گیری کرد که محصول در سیستم آزمایشگاهی دارای ساختار یک escRNA ماهی و بروملی (1970) در انتشار اصلی خود نیز بیان کردند که برخی از محصولات در یک سیستم آزمایشگاهی تولید شده توسط یک آنزیم سیتوپلاسمی باید یک esRNA باشد. هیبریداسیون اختصاصی تولید تقریباً منحصراً scRNA توسط آنزیم سیتوپلاسمی را تأیید کرد، همانطور که برای اولین بار توسط Scholtissek (1969) نشان داده شد. کمتر از 90٪ آن دارای یک توالی پایه مکمل svRNA است Hastie و Mahy (1973) "دریافتند که درصد قابل توجهی از محصول در سیستم ieme in vitro که توسط یک آنزیم هسته‌ای در حضور اکتینومایسین D سنتز می‌شود، قادر به هیبریداسیون با vRNA بدون برچسب نبود. هنوز مشخص نیست که کدام نوع RNA قادر به چنین هیبریداسیونی نیست. بخش بسیار کمی از RNA سنتز شده در این شرایط با acRNA بدون برچسب هیبرید می شود (Scholtissek، داده های منتشر نشده).

سینتیک ادغام GTP نشاندار شده در RNA ویروسی را می توان به عنوان نشان دهنده این است که هیچ شروع مجدد سنتز RNA در سیستم آزمایشگاهی وجود ندارد. اگر آماده‌سازی آنزیم خام در غلظت‌های کم نمک انکوبه شود، تقریباً تمام RNA‌های تازه سنتز شده در ابتدا تک رشته‌ای هستند. با این حال، پس از استخراج با فنل، "درصد زیادی از RNA مقاوم به RNAase می شود. فنل ساختار تکثیر میانی را که از یک الگوی تک رشته ای و scRNA تازه سنتز شده در محل تکثیر توسط مولکول پلیمراز با هم نگه داشته شده است، به قسمتی تبدیل می کند. ساختار دو رشته ای (فیکس و همکاران، 1967؛ اوبرگ و فیلیپسون، 1971). این داده ها در مورد محصول آنزیم ویروس آنفولانزا در سیستم آزمایشگاهی را می توان به گونه ای تفسیر کرد که پلیمراز نه تنها پلیمریزاسیون را آغاز کرده و ادامه می دهد، بلکه زنجیره تازه سنتز شده را از قالب خود جدا می کند. در غیر این صورت، یک ساختار RNA دو رشته ای تشکیل می شود که "عملکردهای بیولوژیکی" ندارد (Paffenholz, Scholtissek, 1973). ).

این خاصیت RNA پلیمراز ویروس آنفولانزا برای سنتز منحصراً scRNA در یک سیستم آزمایشگاهی مورد استفاده قرار گرفته است.

برای ایجاد رابطه ژنتیکی سویه های مختلف ویروس آنفولانزا با تعیین همولوژی در توالی پایه بین آنها فراخوانده شده است (Scholtissek, Rott, 1969b؛ Hobson, Scholtissek, 1970؛ Anschutz et al., 1972).

IV. سنتز پروتئین های ویروسی

A. ترجمه آزمایشگاهی

مشکل اینکه کدام نوع RNA - چه یونی ویر یا مکمل - "برای سنتز پروتئین های ویروسی آموزنده است، هنوز حل نشده است. نتایج متناقضی در مورد نوع RNA ویژه ویروس مرتبط با پلی زوم ها به دست آمده است. Nayak (1970) در ناحیه پلی سومالی گرادیان ساکارز، عمدتاً vRNA، یافت شد، در حالی که Pons (1972) به طور انحصاری scRNA را از polysam جدا کرد. مورد دوم با مشاهده اینکه پس از افزودن 2 ساعت پس از عفونت، اکتینومایسین D، که ترجیحاً سنتز را تحت تأثیر قرار می دهد تأیید شد. از scRNA (به بخش III، B، 1 مراجعه کنید)، در پلی زوم های سلول های آلوده، ecRNA شناسایی نمی شود (Pons, 1973).

Siegert و همکاران (1973) با استفاده از "سیستم سنتز پروتئین از E. coli و vRNA آنفلوانزا به عنوان یک الگو، تولید یک پروتئین NP ویروسی را در شرایط آزمایشگاهی مشاهده کردند. این پروتئین NP نشاندار شده با روش رسوب ژل Ouchterlony مشخص شد. در مقابل، کینگزبری و وبستر (1973) هیچ سنتز پروتئین ویروسی از vRNA را با استفاده از یک سیستم سنتز پروتئین مشتق شده از رتیکولوسیت های خرگوش مشاهده نکردند، با این حال، آنها سنتز پروتئین M-ویروسی را یافتند (جلد فصل 2). بر روی یک الگوی RNA جدا شده از سلول های آلوده. بنابراین، در حال حاضر نمی توان به این سوال پاسخ داد که آیا فقط ویریوپ یا فقط مکمل، یا برخی از قطعات RNA از یک نوع و برخی قطعات RNA از نوع دیگر به عنوان الگوهایی برای سنتز پروتئین استفاده می شوند. برای ویروس های آنفولانزا دشوار است که تعریف زنجیره ویروسی "منفی" یا "مثبت" را همانطور که توسط بالتیمور (1971) ارائه شده است، اعمال کنند.

ب. سنتز پروتئین های ویروسی در داخل بدن

مطالعه سنتز "پروتئین"های ویروسی با این واقعیت مورد علاقه است که در سلول آلوده سنتز پلی پپتیدهای سلولی با سنتز ویژه ویروس جایگزین می شود. در سلول های فیبروبلاست جنین مرغ آلوده به HPV (Joss et al., 1969; Skehel, 1972; Klenk, Rott, 1973) و در سلول های BHK 2IF آلوده به سویه WSN ویروس آنفلوانزا (Lasarowitz et al., 1971) ساعت بعد از عفونت، تقریبا

فقط یک پروتئین ویروسی (31). محققان تا حدودی قبلی سنتز سه یا چهار پلی پپتید را در کنه های آلوده مشاهده کردند (تیلور و همکاران، 1969؛ جاس و همکاران، 1969؛ هالند و کیهن، 1970؛ وایت و همکاران، 1970). پلی پپتیدهای دیگر متعاقباً کشف شدند (لازوروویتز و همکاران، 1971؛ اسکل، 1972؛ کلنک و همکاران، 1972b؛ کروگ و اتکیند، 1973). به طور کلی، تمام آلفا-پروتئین های ساختاری در سلول های آلوده یافت شدند: یک یا دو پروتئین P، زیرواحد نوکلئوکاپوئید NP، پروتئین غشایی M، گلیکوپروتئین هماگلوتینیم به شکل های بدون شکاف (HA) و شکاف (HA1 و HA2) و زیر واحد NA. .

علاوه بر پروتئین‌های ویریون، یک یا دو پروتئین غیر ساختاری (NS) توصیف شده‌اند.

تفاوت های قابل توجهی وجود دارد<в уровнях синтеза отдельных вирусных полипептидов. NP- и NS-полипептиды обычно первыми обнаруживаются в зараженных «летках. Skehel (1973) предположил, что полипептиды Р2, NP и NS, которые первыми обнаруживаются в «клетках, зараженных ВЧП, являются

محصولات قطعات RNA که در طول رونویسی انتخابی توسط ویریون پلیمراز سه قطعه از ژنوم ویروسی تشکیل می شوند. هنگامی که سلول ها در حضور سیکلوهگزیماید آلوده شدند و پس از حذف آنتی بیوتیک برچسب پالس اضافه شد، تنها این سه پلی پپتید یافت شد. بر این اساس، فرض بر این بود که مولکول‌های RNA این اجزا با کمک لولیمراز ویریون معرفی‌شده در فرآیند رونویسی اولیه تشکیل شده‌اند. از ساعت چهارم تا ششم پس از عفونت فیبروبلاست مرغ با MPS، سطح سنتز پروتئین M افزایش می یابد، در حالی که سنتز NS-lolileptide کاهش می یابد (Skehel, 1972, 1973). بنابراین، سطوح سنتز یولیپید را می توان به صورت جداگانه کنترل کرد و می تواند در طول چرخه رشد متفاوت باشد.

جدای از برش پلی پپتید HA به HA1 و HA2، هیچ مدرکی مبنی بر اینکه پلی پپتیدهای خاص آنفولانزای ویروسی از برش پیش سازهای بزرگ ناشی می شود وجود ندارد (Taylor et al., 1969; Lazarowitz et al., 1971, Skehel, 1972 K; ، روت، 1973).

اخیراً اطلاعات جدیدی در مورد محلی سازی اجزای ویروسی در سلول های آلوده با استفاده از اتورادیوگرافی (Becht, 1971) یا تکه تکه سازی سلولی و تکنیک های الکتروفورز ژل به دست آمده است (Taylor et al., 1969, 1970). بر اساس این مطالعات، سنتز تمام پروتئین های ویروسی ظاهراً در سیتوپلاسم انجام می شود. مطالعات محلی سازی قبلی آنتی ژن نوکلئوپروتئین توسط ایمونوفلورسانس به گونه ای تفسیر شده است که نشان می دهد سنتز در هسته با انتشار بعدی آنتی ژن در سیتوپلاسم رخ می دهد (Liu, 1955؛ Breitenfeld and Schafer, 1957; Holtermann et al., 1190). با این حال، واضح است که ایمونوفلورسانس تجمع آنتی ژن، و نه سنتز آن را تعیین می کند (به بخش IV، B، 2 مراجعه کنید).

1. RNA پلیمراز

فعالیت RNA پلیمراز وابسته به RNA خاص ویروس را می توان در سلول های آلوده به ویروس آنفلوانزا بین 13 روزگی تا 3 ساعت پس از عفونت، بسته به سیستم سلولی مورد استفاده شناسایی کرد (Scholtissek and Rott, 1969a; Skehel and Burke, 1969; Ruck et al. ، 1969؛ ماهی و بروملی، 1970). این اولین فعالیت ویروسی خاص پس از عفونت است. بیشتر فعالیت ویروسی لولیمراز در بخش میکروزومی تشخیص داده می شود. بخشی از این فعالیت در هسته ها باقی می ماند و حتی با شستشوی شدید نمی توان از آنجا خارج شد. هیچ تفاوت اساسی در سینتیک تظاهرات یا در کوفاکتورهای مورد نیاز بین آنزیم های هسته ای و میکروزومی وجود ندارد (Scholtissek and Rott, 1969a; Mahy et al., 1975).

با تکه تکه شدن بیشتر سیتوپلاسم در یک گرادیان ساکارز گام به گام با روش کالیگوئیری و تام (1970)، فعالیت پلیمراز در غشاهای ناهموار یافت می شود (Compans and Caliguiri, 1973; Klenk et al., 1974a).

از آنجایی که فعالیت پلیمراز ویروسی در ذرات ویروسی خالص شده یافت شد (به فصل 5 مراجعه کنید)، این سوال مطرح می شود که با کدام یک از "پروتئین های" ویروسی می توان مرتبط باشد. تنها محصول ویژه ویروس مرتبط با فعالیت پلیمراز آنتی ژن RNP (پروتئین NP به اضافه vRNA ویروسی، تعیین شده توسط تثبیت مکمل) بود. تمام تلاش ها برای حذف RNA از این مجموعه منجر به از دست دادن کامل فعالیت آنزیم شد (Schwarz and Scholtissek, 1973). پروتئین P به عنوان یک نامزد برای نقش پلیمراز ویروسی مطرح شد (Kilbourne et al., 1972). هنگامی که «کمپلکس آنزیمی نشان‌دار شده در داخل بدن با اسیدهای آمینه» از سلول‌های آلوده به ویروس آنفولانزا جدا شد و حدود 35 بار خالص شد، آنالیز الکتروفورتیک در ابتدا فقط Np-whitea را در این مجموعه نشان داد.< (Compans, Caliguiri, 1973). Впоследствии, однако, при других условиях введения;метки удалось обнаружить и Р-белок (Caliguiri, Compans, 1974). С другой стороны, Klenk и соавт. (1974) обнаружили Р-белок в цитоплазматическом золе, "который не обладает полимеразной активностью (Scholtissek, Rott, 1969a; Skehel, Burke, 1969). Эти наблюдения могут означать, что Р-белок осуществляет свою (Предполагаемую активность ферментов только при связывании с РНП-антигеном.

اینکه آنتی ژن RNP خود دارای فعالیت پلیمراز باشد بعید است، زیرا سرم هایپرایمن در برابر آنتی ژن RNP فعالیت پلیمراز را مهار نمی کند، در حالی که سرم نقاهت که ممکن است حاوی آنتی بادی های پلیمراز باشد، آن را مهار می کند (Scholtissek et al., 1971). این سرم نقاهت‌آور (که از حیواناتی که به ویروس‌های آنفولانزای A آلوده شده بودند به‌دست آمد) فعالیت پلیمراز همه سویه‌های ویروس آنفولانزای A را مهار کرد، اما فعالیت پلیمراز ویروس آنفلوانزا B را مهار نکرد. همه این مشاهدات با این ایده مطابقت دارند. که آنتی ژن RNP (BPHK + NP = = پروتئین)، می تواند به عنوان الگویی برای سنتز ecRNA عمل کند.

2. پروتئین نوکلئوکپسید

پروتئین NP به RNA ویروسی متصل می شود و آنتی ژن RNP را تشکیل می دهد.

تقریباً 3 ساعت پس از عفونت، یک ساعت قبل از ظهور هماگلوتینین (Breitenfeld, Schafer, 1957). پس از این مدت، تیتر آنتی ژن RNP به طور قابل توجهی افزایش نمی یابد. این ممکن است به دلیل تعادل بین سنتز جدید و ادغام در ذرات بالغ باشد. با توجه به برچسب، پروتئین NP را می توان در سلول های آلوده در عرض 2 ساعت پس از عفونت شناسایی کرد (Scholtissek and Rott, 1961; Krug, 1972).

با کمک آنتی بادی های فلورسنت، ابتدا آنتی ژن RNP در هسته ها شناسایی می شود. بعداً در سیتوپلاسم نیز ظاهر می شود (Breitenfeld and Schafer, 1957). تحت شرایط خاصی، مانند عفونت ناقص (فرانکلین، بریتنفلد، 1959)، در حضور p-فلوروفنیل آلانین (Zimmer-mann, Schafer، 1960)، یا تحت شرایط پدیده فون مگنوس (Rott, Scholtissek, 1963)، RNP -آنتی ژن در هسته ها باقی می ماند.

تجمع اولیه آنتی ژن RNP در هسته سلول های آلوده به این معنی نیست که پروتئین NP نیز در داخل هسته سنتز می شود. مطالعات اتورادیوگرافی و همچنین استفاده از روش‌های تقسیم سلولی، سنتز سیتوپلاسمی این پروتئین و پروتئین غنی از آرژنین دیگر و انتقال سریع آن‌ها از سیتوپلاسم به هسته را نشان می‌دهد (Taylor et al., 1969, 1970; Becht, 1971).

در عصاره سلول های آلوده، بخش خاصی از آنتی ژن RNP حاوی ecRNA است (پونز، 1971؛ کروگ، 1972؛ کروگ و اتکیند، 1973)، اگرچه تنها یک نوع RNA در ذرات ویروسی یافت می شود (که ناشی از عدم وجود هرگونه خود هیبریداسیون vRNA) (Scholtissek, Rott, 1971; Pons, 1971). نمی توان تصمیم گرفت که آیا آنتی ژن RNP حاوی ecRNA اهمیت خاصی در فرآیند تولید مثل ویروسی دارد یا اینکه فقط یک مصنوع است که در فرآیند تقسیم سلولی ظاهر می شود. نشان داده شده است که هر دو رشته RNA در شرایط آزمایشگاهی به خوبی به پروتئین NP متصل می شوند (Scholtissek and Becht, 1971). بنابراین، اگر پروتئین NP آزاد و scRNA آزاد وجود داشته باشد، آنتی ژن RNP مربوطه بلافاصله در طول فرآیند همگن سازی تشکیل می شود. Virion RNA را می توان از آنتی ژن RNP پلیوین "Ilsulfate O" M جابجا کرد (Pons et al., 1969). بنابراین، می توان آزمایش کرد که آیا جایگزینی RNA های ویروسی مختلف در آنتی ژن RNP در هموژنه های سلولی امکان پذیر است یا خیر. کروگ (1972) از تغییرات در ترکیب بازهای RNA ویروسی که برای دوره های زمانی مختلف با 32P نشاندار شده و از آنتی ژن RNP سیتوپلاسمی جدا شده است، نتیجه می گیرد که بخشی از ecRNA، قبل از اینکه در آنتی ژن RNP قرار گیرد، وجود دارد. یک فرم عاری از NP-squirrel. ادغام 32P در RNA سلول حیوانی با یک فاز تاخیری قابل توجه به دلیل ادغام نسبتاً آهسته فسفر نشاندار شده "در" (موقعیت x تری فسفات های نوکلئوزیدی (Scholtissek, 1965) با یک فاز تاخیری قابل توجه رخ می دهد.

دلایل ارائه نشده است، داده های کروگ (1972) باید با احتیاط تفسیر شوند.

تجزیه و تحلیل جنبشی کروگ (1972) از "ظاهر آنتی ژن RNP در هسته ها و سیتوپلاسم" نشان می دهد که آنتی ژن RNP که در هسته ها تجمع می یابد، پیش ساز آنتی ژن RNP موجود در سیتوپلاسم نیست.

3. پروتئین های غیر ساختاری

چندین پروتئین غیر ساختاری ویژه ویروس با عملکرد ناشناخته برای سلول های آلوده توصیف شده است. یکی از آنها، با وزن مولکولی نسبی 25000، که در مقادیر زیاد انباشته می شود، به عنوان NS تعیین شد (Lazarowitz et al., 1971). در ژل های پلی آکریل آمید، سرعت مهاجرت نزدیک به تحرک پروتئین M دارد. به نظر می رسد که هر دو پروتئین از یکدیگر مستقل هستند، همانطور که از تفاوت در نقشه های پپتیدی آنها مشاهده می شود. "مقدار زیادی از پروتئین NS-" در هسته ها یافت می شود (Lazarowitz et al., 1971; Krug, Etkind, 1973). این یافته‌ها با داده‌های مطالعات ایمونوفلورسانس قبلی Dimock (1969) مطابقت دارد، که "رنگ‌آمیزی روشن هسته‌ها با آنتی سرم مخصوص آنتی‌ژن‌های ویروسی غیرساختاری را مشاهده کرد، و این رنگ‌آمیزی احتمالاً منعکس کننده حضور پروتئین NS-" بود. دریافت که این پروتئین همچنین پروتئین ویژه ویروس اصلی در بخش‌هایی از ریبوزوم‌های آزاد و متصل به غشاء جدا شده از سلول‌های آلوده است (Pons, 1972; Compans, 1973; Klenk et al., 1974a). به نظر می رسد ارتباط NS با ریبوزوم ها به تناژ بستگی دارد (Krug and Etkind, 1973). در بافرهایی با قدرت یونی پایین، این نولیپاپتید بر روی هر دو زیر واحد ریبوزومی جذب می‌شود، در حالی که وقتی نمک اضافه می‌شود، از آنها حذف می‌شود.

یک مطالعه اخیر (گرگوریادس، 1973) تردیدهایی را در مورد شناسایی NS به عنوان یک پلی پپتید غیرساختاری متمایز از پلی پپتید ویریون M از سلول های آلوده، هسته های α یا پلی زوم ها ایجاد کرد. تجزیه و تحلیل محصولات پردازش تریپتیک پروتئین M، به عنوان همچنین پروتئین های بتا مرتبط با هسته و ریبوزوم، منجر به تصادفات بسیاری شد که نشان می دهد پروتئین های M و NS یکسان هستند.

علاوه بر NS، ممکن است اجزای غیر ساختاری ویژه ویروس دیگری نیز وجود داشته باشد، اگرچه هیچ یک از آنها وجود ندارد. به اندازه کافی مشخص نشده است. استفاده از آنتی سرم ضد آنتی ژن های غیر ساختاری ویروسی،

Dimmock و Watson (1969) پلی پپتیدهای نشاندار شده رادیواکتیو را از سلولهای آلوده رسوب دادند. تجزیه و تحلیل الکتروفورتیک در ژل پلی آکریل آمید وجود چندین پلی پپتید غیر ساختاری با جزء اصلی مربوط به NS را پیشنهاد کرد. یکی از اجزای غیر ساختاری باقیمانده با سرعت بیشتری مهاجرت می کند و ممکن است با 10000 تا 15000 جزء وزن مولکولی نسبی که توسط Skehel (1972)، Krug و Etkind (1973) توصیف شده است مطابقت داشته باشد.

4. غشاء M-پروتئین

پروتئین M که سطح داخلی دولایه لیپیدی پوشش را می‌پوشاند و سرشار از ویریون است، در سلول‌های آلوده در مقادیر نسبتاً کم یافت می‌شود. این احتمال وجود دارد که این سنتز مرحله محدود کننده سرعت تولید مثل ویروس باشد (لازاروویتز و همکاران، 1971) این مفهوم توسط داده هایی پشتیبانی می شود که در دمای 29 درجه سانتیگراد، که در آن تشکیل ویروس سرکوب می شود، M پروتئین تنها پروتئین (ویروسوپدی) است که در سلول های آلوده قابل تشخیص نیست (Klenk, Rott, 1973).

پروتئین M (را می توان بر روی غشای صاف و پلاسمایی سلول های آلوده یافت (Lazarowitz et al., 1971; Corn-pans, 1973a; Klenk et al., 1974a). این داده ها نشان دهنده میل ترکیبی این پروتئین با غشاها است.

5. هماگلوتینین

هماگلوتینین به عنوان یک گلیکوپروتئین بزرگ سنتز می شود - یک پیش ساز HA، که متعاقباً به دو گلیکوپروتئین کوچکتر تقسیم می شود: HAi و HA2 "(Lazarowitz" t al., 1971). 1973)، ظاهراً آنزیم های پروتئولیتیک سلول میزبان انجام می شود (Lazarowitz et al., 1973). درجه برش به سویه ویروس، سلول میزبان، سطح اثر سیتوئیاتیک و وجود یا عدم وجود سرم در سلول بستگی دارد. محیط (Lazarowitz et al., 1971, 1973a, b Klenk and Rott 1973 Stanley et al. serm) اما در حضور سرم، هماگلوتینین WSN نیز بریده می شود.

این سیستم بر روی غشای پلاسمایی انجام می شود (Lazaro-witz et al., 1973a). در سیستم VChP، مکانیسم چنین تقسیم، ظاهرا، متفاوت است. شکاف بر روی غشاهای داخل سلولی رخ می دهد و پلاسمینوژن در این مورد ضروری نیست (Shchepk et al., 1974a). درجه شکافتن به شدت سه 25 درجه سانتیگراد کاهش می یابد (Klenk, Rott, 1973).

برش HA شرط لازم برای فعالیت هماگلوتیناسیون و برای تجمع ویریون نیست (Lazarowitz et al., 1973a; Stanley et al., 1973)، اما مطالعات اخیر "نشان داده اند که برای عفونت لازم است (Klenk et al., 1975b. این داده‌ها با این فرضیه مطابقت دارند که HA* علاوه بر نقش آن در جذب، عملکرد دیگری نیز در فرآیند عفونی دارد و برای این عملکرد لازم است برش سلول‌های میزبان و ذرات حاوی HA بدون شکاف دارای قابلیت عفونی پایین هستند. محدوده میزبان و گسترش عفونت ویروس آنفولانزا به حضور پروتئاز سلول میزبان به عنوان یک آنزیم فعال کننده بستگی دارد.

در آزمایش‌هایی که روی تقسیم‌بندی «سلول‌های آلوده به

ویروس آنفولانزا، مشخص شد که گلیکوپروتئین های HA همیشه ac هستند

مرتبط با غشاها (Compans, 1973a; Klenk et al.,.

1974 a). محلی سازی داخل سلولی این پروتئین ها و لحظه آنها

واکی تاکی از غشاهای خشن تا اندولاسماتیک صاف

شبکه و به غشای پلاسمایی خواهد بود

به طور مفصل در بخش VII، B توضیح داده شده است. .،

6. نورآمینیداز

ویروس NA* به عنوان یک آنزیم فعال یافت شد،

3 ساعت پس از عفونت در غشای کوریون-آلانتوئیک

نه، و با برون یابی مشخص شد که آغاز syn او است

پایان نامه 1-2 ساعت پس از عفونت رخ می دهد (نول و همکاران،

1961). محلی سازی داخل سلولی NA * توسط مورد مطالعه قرار گرفت

شکنش سلولی، و متوجه شد که ظاهرا

mu، شبیه به محلی سازی HA* (Compans, 1973a؛ Klenk et al.,

1974 a). NA* در ارتباط با غشاها یافت شده است،

مشتق شده از شبکه آندوپلاسمی صاف

هنگام تعیین آن با فعالیت بیولوژیکی و با تجزیه و تحلیل

zu در ژل پلی آگریلامید. فعالیت آنزیم پیدا شد

همچنین در فراکسیون های حاوی غشاهای زبر

ما این داده ها با داده های به دست آمده مطابقت دارند

ایمونوفلورسانس (Maeno، Kilbourne، 1970). بعد از 4 ساعت

پس از عفونت، یایرامینیداز را می توان در سیتو تشخیص داد

پلاسما؛ بعداً به نظر می رسد که او روی پری تمرکز می کند

فریا سلولی

V. سنتز کربوهیدرات ها

کربوهیدرات ها در تشکیل گلیکوپروتئین ها و گلیکولیلیدهای پوشش ویروس آنفولانزا نقش دارند (Klenk et al., 1972a). گلیکولیپیدهای میکسوویروس ها (مشتق شده از غشای پلاسمایی سلول میزبان (Klenk، Choppin، 1970)، "اما مشخص نشده است که چه چیزی غالب است (شامل در ویریون: گلیکولیپیدهای موجود یا تازه سنتز شده).

استفاده از پیش سازهای رادیواکتیو مانند گلوکزامین، مانوز، گالاکتوز و فوکوز، که به طور خاص در گلمکوپلتیدهای ویروسی گنجانده شده اند، نشان داده است که زنجیره های جانبی کربوهیدرات این گلیکوپپتیدها در طول عفونت دوباره سنتز می شوند (Haslam et al., 1970; Corn, al. 1970؛ شوارتز و کلنک، 1974). آزمایشات شکنش سلولی اطلاعات بیشتری را در مورد محل های گلیکوزیلاسیون گلیکوپروتئین های ویروسی ارائه کرده است.گلوکزامین با پلی پپتید HA در بخش هایی از غشاهای سیتوپلمیک صاف و خشن مرتبط است؛ با این حال، فوکوز با HA در غشاهای صاف اما نه ناهموار مرتبط است (Compans, 19, 19). سرکوب سنتز پروتئین توسط پورومایسین ترکیب گلوکزامین را تقریباً بلافاصله متوقف می کند، در حالی که فوکوز به مدت حدود 10 تا 15 دقیقه به ترکیب خود ادامه می دهد (Stanley et al., 1973).<и НА2 содержат, по-видимому, полный состав маннозы « глюкозамина, тогда как содержание фукозы и галактозы значительно выше в продуктах расщепления (Klenk et al., 1975a; Schwarz, Klenk, 1974). Эта наблюдения предполагают, что биосинтез углеводных боковых целей гликопротеинов НА осуществляется по стадиям с различными остатками Сахаров, добавляемыми в разных участках клетки. Глюкозамин и манноза (присоединяются, по-видимому, к полипептидам НА на шероховатых мембранах вскоре после или даже в процессе синтеза поляпептида, в то время как фукоза, вероятно, прикрепляется позже с помощью трансфераз, присутствующих в гладких мембранах.

این گلیکوزیل ترانسفرازها احتمالاً آنزیم های سلولی هستند. در نتیجه، کربوهیدرات (بخشی از گلیکوپروتئین ها ظاهراً توسط سلول میزبان تعیین می شود. با این حال، شواهدی وجود دارد که علاوه بر این آنزیم های سلول میزبان، NA* ویروسی نقش مهمی در تشکیل زنجیره های جانبی کربوهیدرات ایفا می کند. ثابت شده است که سطح پوشش‌های مایکئوویروس فاقد اسید نورآمینیک است (Klenk and Choppin, 1970b; Klenk et al., 1970) در حالی که در پاکت‌های ویروسی که حاوی این آنزیم نیستند، این کربوهیدرات یک ترکیب رایج است (Klenk and Choppin, 1971). ؛ مک شری و واگنر، 1971؛ رنکنن و همکاران، 1971) این داده ها نشان می دهد که

عملکرد اسید نورآمینیک یکی از ویژگی های ضروری میکسو ویروس ها است. اخیراً نشان داده شده است که NA* مسئول حذف نورآمینیک اسید از پوشش ویروس آنفولانزا است، در نتیجه از تشکیل گیرنده هایی بر روی پوشش ویروسی که در غیر این صورت منجر به تشکیل توده های بزرگی از ذرات ویروسی می شود، جلوگیری می کند (Palese et al., 1974). این داده ها از این مفهوم حمایت می کنند که بخش کربوهیدرات HA* به عنوان گلیکوپروتئین سطح اصلی محصول اثر ترکیبی (ترانسفرازهای سلولی و NA ویروسی*) است. ویروس از طریق عمل خود قادر به ایجاد یک اصلاح خاص ویروس است. در ساختار (در ابتدا ساختار اصلاح کربوهیدرات پیچیده اختصاصی میزبان، که طبق ظاهراً برای فعالیت بیولوژیکی ویروس ضروری است.

D-گلوکزامین و 2-deoxy-0-glk>بز از تشکیل HA*، NA* و ویروس عفونی فعال بیولوژیکی جلوگیری می کنند (Kilbourne, 1959; Kaluza et al., 1972). مطالعات بیوشیمیایی نشان داده اند که این قندها با بیوسنتز گلیکوگروتئین های ویروسی رقابت می کنند (Ghandi et al., 1972; Klenk et al., 1972b). در حضور این مهارکننده ها اندازه گلیکوپروتئین HA کاهش می یابد درجه کاهش بستگی به دوز دارد بنابراین با افزایش غلظت قند، گلیکوپروتئین HA با وزن مولکولی نسبی 76000 به تدریج به ترکیبی با وزن مولکولی تبدیل می شود. از 64000، که به عنوان HA0 تعیین شد (Klenk et al., 1972b; Schwarz, Klenk, 1974) تغییر وزن مولکولی به موازات کاهش محتوای کربوهیدرات است و پروتئین HA0 تقریباً فاقد کربوهیدرات است (Schwarz, Klenk, این نتایج نشان می دهد که HA0 یک زنجیره پلی پپتیدی ناقص گلیکوزیله یا غیر گلیکوزیله از گلیکوپروتئین HA است و "اثر مهاری D-گلوکز آمین a و 2-deoxy-0-گلوکز به دلیل آسیب به گلیکوزیلاسیون است. پلی پپتید HA0 با غشاها مرتبط است، مانند HA معمولی، همچنین از شبکه خشن به شبکه اژدوپلاستیک صاف مهاجرت می کند، جایی که به پلی پپتیدهای HA01 و HA02 شکاف می دهد. احتمالاً برای میل ترکیبی این پلی پپتید برای غشاء ضروری نیست. با این حال، فقدان فعالیت هماگلوتیناسیون در سلول های آلوده نشان می دهد که پروتئین غیر گلیکوزیله قادر به اتصال به گیرنده ها نیست.

VI. سنتز لیپید

ویروس آنفولانزا مانند همه ویروس های پوشیده شده، لیپیدهای خود را با استفاده از لیپیدهای سلول میزبان به دست می آورد. این موضع با مشاهدات زیر تأیید می شود.

دنیا ترکیب لیپیدی ویروس آنفولانزا شبیه به ترکیب سلول میزبان است (آمبروستر و بیس، 1958؛ فرومهاگن و همکاران، 1959). لیپیدهای سلول میزبان، که به صورت رادیواکتیو قبل از عفونت نشاندار شده اند، در ذرات ویروسی گنجانده می شوند (وکر، 1957). هنگام رشد ویروس در سلول های میزبان مختلف، تغییراتی در لیپیدهای ویروسی شناسایی می شود (کیتز و همکاران، 1961، 1962). به طور کلی، لیپیدهای ویروس ها (که از سطح سلول بیرون می زند، ترکیب چربی غشای پلاسمایی سلول میزبان را منعکس می کند (کلنک و شوپین، 1969؛ 1970a, b؛ رنکو-نن و همکاران، 1971). اسفولیلیدها در فیبروبلاست جوجه سلول ها به مدت 7 ساعت پس از عفونت با ویروس آنفولانزا بدون تغییر باقی ماندند، پس از آن تمام سنتز چربی سرکوب شد (Blough et al., 1973). این سرکوب احتمالاً یک اثر اولیه نیست و ممکن است ثانویه در ارتباط با مهار RNA یا سنتز پروتئین، یا به ".سایر اثرات سیتولیتیک.

بنابراین، بر اساس نتایج به‌دست‌آمده تاکنون، می‌توان فرض کرد که سنتز لیپیدهای ویروسی از طریق فرآیندهای سلولی طبیعی بیوسنتز لیپید انجام می‌شود و پوشش ویروسی با ترکیب لیپیدها از غشای پلاسمایی سلول میزبان تشکیل می‌شود.

VII. مونتاژ (همچنین به فصل 2 مراجعه کنید)

الف. تشکیل نوکلئوکاپسید

همانطور که قبلا ذکر شد، به احتمال زیاد پروتئین نوکلئوکپسید در سیتوپلاسم سنتز می شود. ظاهراً برای مدت کوتاهی به شکل آزاد در آنجا وجود دارد و سپس با RNA ویروسی مرتبط می‌شود و نوکلئوکپسیدها را تشکیل می‌دهد (کلنک و همکاران، 1974؛ Compans و Caliguiri، 1973). از آنجایی که پروتئین NP به سرعت در نوکلئوکپسیدها گنجانده می شود، RNA را می توان از استخر اصلاح شده n انتخاب کرد (Krug, 1972). به دلیل اندازه کوچک نوکلئوکپسیدهای ویروس آنفلوانزا، نمی توان آنها را با استفاده از میکروسکوپ الکترونی در سلول های آلوده به طور دقیق شناسایی کرد. خوشه هایی از رشته ها یا الیاف با قطر حدود 5 نانومتر، مشاهده شده در سیتوپلاسم، احتمالاً نشان دهنده ریبونوکلئوپروتئین های ویروسی هستند (Apostolov et al., 1970; Compans et al., 1970b).

داده های موجود نشان می دهد که ژنوم RNA ویریون های ویروس آنفولانزا از 5-7 قطعه تشکیل شده است (به فصل 6 مراجعه کنید).

بنابراین، هر ذره عفونی به حداقل یک کپی از هر قطعه نیاز دارد. هرست (1962) قبل از

پیشنهاد کرد که نوکلئوکپسیدهای حوضچه درون سلولی را می توان در (ویریون ها به طور تصادفی) گنجاند. نسبت "ویریون های عفونی در جمعیت E را می توان با اضافه کردن قطعات RNA اضافی در ویروس متوسط ​​افزایش داد (Compans et al., 1970). اگر پنج قطعه RNA مختلف، هر ویرنا در مجموع شامل 7 قطعه باشد که در یک مورد ویروسی گنجانده شده است، تقریباً 22٪ از ویریون ها باید عفونی باشند. شواهد برای گنجاندن تصادفی قطعات RNA توسط مشاهدات اخیر توسط Hirst (1973) تأیید شد. که در جمعیت ویروسی، نوترکیبی بین ذرات غیر تشکیل‌دهنده پلاک اتفاق می‌افتد. توانایی این ذرات برای مشارکت در نوترکیبی را می‌توان با عدم وجود یک یا چند قطعه در ذرات توضیح داد، در حالی که قطعات گمشده را از یک ذره به ذره دیگر تغییر می‌دهد. بنابراین، لانه های مناسب یک ویروس معیوب می توانند نوترکیب تشکیل دهند.

ب. فرآیند جوانه زدن ویروس

مانند بسیاری از ویروس های پوششی، ویروس آنفولانزا بر روی غشای سلولی از پیش ساخته شده جمع می شود. مونتاژ با جوانه زدن از غشای پلاسمایی انجام می شود. اولین نمایش انتشار یک ویروس از یک "سلول توسط فرآیندی که شامل لیز نمی شود" توسط مورفی و بنگ (1952) در مطالعات میکروسکوپ الکترونی اولیه سلول های آلوده به ویروس آنفولانزا ارائه شد. ■ ساختارهای کروی. در طول تشکیل "ویروس عفونی" هیچ ذره ویروسی در داخل سلول ها دیده نشد و از این رو مشخص بود که ذرات ویروسی در سطح سلول تشکیل می شوند. با استفاده از آنتی بادی های نشاندار شده با فریتین، آنتی ژن ویروسی مورگان و همکاران در آن نواحی جایی که ویروس در آن شکل می گیرد. مطالعات میکروسکوپ الکترونی بعدی نشان داده است که سطح ویروس جوانه زده دارای غشایی مشابه با سلول میزبان با لایه ای از برآمدگی های مربوط به "میخ های" ویروسی در سطح خارجی است. روی سطح غشای ویروسی یک لایه الکترونی متراکم اضافی در سطح سلول وجود ندارد که احتمالاً از M-iolypeptides تشکیل شده است (Bachi et al., 1969; Compans and Dimmock, 1969; Apostolov et al., 1970).

مطالعات میکروسکوپ الکترونی زمینه ای را برای نشان دادن ترتیبی که در آن اجزای ویروسی به عنوان-

روی غشای سلولی معاشرت کنید (باچی و همکاران، 1961؛ کامپس و دیموک، 1969؛ کامپس و همکاران، 1970 ب).

پروتئین های پوشش ویروسی ابتدا ظاهر می شوند و در برخی از مناطق غشاء قرار می گیرند که باید مورفولوژی طبیعی داشته باشند. با این حال، جذب خاص گلبول های قرمز به این مناطق از غشاء نشان دهنده حضور پروتئین HA در اینجا است. سپس، ظاهراً، پروتئین M (با سطح داخلی چنین مناطقی از غشاها مرتبط می شود و یک لایه الکترونی متراکم تشکیل می دهد. علاوه بر این، ریبونوکلئوپروتئین به طور خاص به غشاء در این نواحی متصل می شود و فرآیند جوانه زدن با خم شدن اتفاق می افتد. داده های الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید نیز از این ایده حمایت می کند که پروتئین های پوششی سریعتر از RNP ها با غشای پلاسما مرتبط می شوند (Lazarowitz et al., 1971) در ویریون های خالص شده یافت می شوند. بقایای اسید نورآمینیک در پوسته ذرات ویروس آنفولانزای جوانه زده وجود ندارد، اما در نواحی مجاور غشای سلولی وجود دارد (کلنک و همکاران، 1970).

این داده ها انتقال شدید در ترکیب شیمیایی بین پوسته یک ذره ویروسی در حال جوانه زدن و غشای سلولی مجاور را ثابت می کند.

با این حال، از سوی دیگر، ویژگی مهم فرآیند جوانه زدن این است که پوشش ویروسی با غشای پلاسمایی سلول میزبان پیوسته است و از نظر مورفولوژیکی شبیه به آن است (Compans and Dimmock, 1969). همانطور که گفته شد، لیپیدهای این غشاها شباهت بسیار زیادی به لیپیدهای غشایی سلول میزبان دارند. این مشاهدات نشان می دهد که لیپیدها در غشای پلاسمایی دست نخورده به آسانی با لیپیدهای موجود در ذرات ویروسی جوانه زده با انتشار شعاعی تبادل می کنند.

بنابراین، پوشش ویریون جوانه زده از بخش کوچکی از غشای سلولی که برای شامل پروتئین های پوشش ویریون اصلاح شده است، تشکیل می شود. البته این مفهوم به معنای نیاز به سنتز تمام اجزای پوششی روی غشای پلاسمایی نیست.

در واقع، برای مدت طولانی شناخته شده است که اجزای پوشش باید فواصل قابل توجهی را از یک مکان سلولی به محل دیگر مهاجرت کنند تا از محل بیوسنتز خود به محل مونتاژ غشاء برسند. Breitenield و Schafer (1957) نشان دادند که در سلول های آلوده به ویروس آنفولانزا، HA * برای اولین بار دیده می شود.

قرار دادن در تمام قسمت های سلول و اینکه در ناحیه دور هسته ای با غلظت افزایش یافته موضعی شود. بعداً، HA* در "ناحیه محیطی" شکاف تجمع می یابد، و همچنین می تواند در رشته های نازکی که از غشای فلر بیرون زده اند، نشان داده شود.

این تصور که اجزای پوششی از داخل سلول به سطح مهاجرت می کنند اخیراً توسط یک سری مطالعات با استفاده از تقسیم سلولی و تجزیه و تحلیل پروتئین های ویروسی در بخش های مختلف سلولی تأیید و گسترش یافته است. این آثار همچنین نشان می‌دهند که گلیکوپروتئین HA و احتمالاً سایر پروتئین‌های پوششی روی شبکه آندوپلاسمی خشن سنتز می‌شوند (Compans, 1973a؛ Klenk et al., 1974). همانطور که در آزمایشات تعقیب پالس تشخیص داده شد، پس از چند دقیقه، HA قبلا در غشای شبکه آندوپلاسمی صاف یافت می شود (Compans, 1973a؛ Stanley et al., 1973; Klenk et al., 1974) و در غشای پلاسمایی (استنلی و همکاران، 1973). اگرچه آزمایش‌هایی برای تعقیب از شبکه آندوپلاسمی صاف به غشای پلاسمایی انجام نشده است، به نظر قابل قبول است که HA از شبکه آندوپلاسمی خشن به غشای پلاسمایی مهاجرت کرده و شبکه آندوپلاسمی صاف را دور می‌زند. لازم به ذکر است که در تمام مدت چنین مهاجرتی، HA و سایر پروتئین های پوششی اجزای غشاهایی هستند که در امتداد آنها حرکت می کنند. OBI ها هرگز به عنوان پروتئین های محلول یافت نمی شوند.

بخش‌هایی از غشاهای صاف، که تصور می‌شود عمدتاً از شبکه آندوپلاسمی مشتق شده‌اند، حاوی تمام پروتئین‌های پوششی اصلی هستند (Compans 1973a؛ Klenk et al., 1974). با این حال، مقادیر نسبی آنها در اینجا با مقادیر موجود در غشای پلاسمایی و ویریون متفاوت است (Stanley et al., 1973; Klenk et al., 1974). نسبت پروتئین M به لایکوپروتکتورهای NA در پوشش ویریون بالغ بیشتر از غشاهای شبکه آندولاسماتیک است. این داده ها نشان می دهد که تنها تعداد کمی از غشاهای حامل گلیکوپروتئین HA به پوشش ویروسی تبدیل می شوند، یعنی بخش هایی از غشاهای حاوی پروتئین های بدون کربوهیدرات. همانطور که قبلا ذکر شد، سنتز پروتئین M ممکن است مرحله ای باشد که روند مونتاژ ویروس را محدود می کند.

تفاوت در سرعت سنتز پروتئین‌های پوششی مختلف، این فرضیه را تأیید می‌کند که مونتاژ پوشش یک فرآیند چند مرحله‌ای است. مسئله فرآیند تشکیل HA*، از جمله افزودن متوالی بخش کربوهیدرات و شکاف پروتئولیتیک در طول مهاجرت محصول ژن اولیه، با این مفهوم سازگار است.

هشتم. انتشار ویروس آنفولانزا

مشکل رهاسازی ویروس آنفولانزا از سلول میزبان،

به نظر می رسد که ارتباط نزدیکی با مشکل عملکرد ویروس دارد

NA*، که قبلاً به تفصیل مورد بحث قرار گرفته است (نگاه کنید به

موارد V و ch. چهار). که این آنزیم نقش اساسی دارد

نقش در انتشار ویروس، ناشی از توانایی ضد

بدن های مخصوص NA* برای سرکوب چنین انتشاری (Se-

به، رات، 1966; وبستر و همکاران G968). علاوه بر این، این آنتی بادی ها

جلوگیری از خروج ویروس از گلبول های قرمز (براون، لیور،

1968). NA* باکتریایی که توسط آنتی بادی مهار نمی شود

NA* لامی تا ویروسی، قادر است ویروس را از سلول ها آزاد کند،

تحت درمان با چنین آنتی بادی هایی (Compans et al., 1969;

وبستر، 1970). از طرف دیگر آنتی بادی های دو ظرفیتی

NA همچنین باعث تجمع ویروس می شود (Seto, Chang, 1969;

Compans و همکاران، 1969; وبستر، 1970)، در حالی که ضد تک ظرفیتی

بدن از انتشار ویروس جلوگیری نمی کند، اگرچه آنها را مهار می کنند

بیش از 90 درصد فعالیت نورآمینیداز (Becht et al., 1971).

همه این داده ها با هم نشان می دهد که

آنتی بادی های دو ظرفیتی از انتشار ویروس جلوگیری می کنند

با اتصال آن به آنتی ژن های موجود در

سطح سلول و با مهار فعالیت fer

پلیس نقش نورآمینیداز در انتشار ویروس غربالگری

یا همچنین Palese et al. (G974)، که دریافت که این فر

برای حذف نورآمیلیک اسید از VI ضروری است

سطح روسی برای جلوگیری از تجمع ویریون ها - سپس -

یاروهای روی سطح سلول

IX اشکال نادرست پرورش

الف. تولیدمثل سقط جنین وابسته به سلول میزبان

ویروس های آنفولانزا می توانند طیف وسیعی از سلول های میزبان را آلوده کنند. با این حال، در بسیاری از سلول های آلوده، بازده نتاج عفونی یا بسیار کم است یا غیرقابل تشخیص است، اگرچه اجزای ویروسی را می توان در تیترهای طبیعی تشخیص داد. در مغز با سویه‌های غیر نوروتروپیک ویروس آنفولانزا (Schlesinger, 1953) آلوده شده است. فقط RNP-I تولید شد.آنتی ژن و هماگلوتینین، اما ویروس عفونی نبود.در تمام این سیستم ها که تاکنون مورد مطالعه قرار گرفته، آنتی ژن RNP در هسته تجمع یافته و شناسایی نشده است.

توسط آنتی بادی های فلورسنت در سیتوپلاسم شناسایی شد (هنله و همکاران، 1955؛ فرانکلین و بریتنفلد، 1959؛ تر میلن و لاو، 1967؛ فریزر، 1967).

ب. پدیده فون مگنوس

در طول مسیرهای متوالی "ویروس های آنفولانزا در تعدد بالاتر از 1 (بری، 1961)، مقادیر فزاینده ای از ویروس ناقص تشکیل می شود که از سلول میزبان خارج می شود (فون مگنوس، 1951، 1952). این ذرات ویروسی دارای یک سطح هستند. ساختار بسیار شبیه به ساختار یک ویروس عفونی، ایمنی زا هستند و باعث تداخل همولوگ می شوند، حاوی RNA و آنتی ژن RNP کمتری هستند، نسبت عفونی کمتری به فعالیت هماگلوتیناسیون نشان می دهند و حاوی چربی بیشتری نسبت به ذرات کامل ویروسی هستند (فون مگنوس، 1954; ایزاکس، 1959؛ پاوکر و همکاران، 1959؛ روت و شافر، 1961؛ روت و شولتیسک، 1963).

در تجزیه و تحلیل RNA یک ویروس ناقص، مشخص شد که RNA ویروسی با وزن مولکولی نسبتاً بالا یا وجود ندارد یا در مقادیر کاهش یافته در آنها وجود دارد، در حالی که مقدار RNA با وزن مولکولی پایین افزایش می یابد (Duesberg, 1968; پونز، هرست، 1969؛ نایاک، 1969).

در سلول های آلوده به دومین گذرگاه رقیق نشده ویروس آنفولانزا، تمام اطلاعات ژنتیکی ویروس وجود دارد، زیرا ecRNA جدا شده از این "سلول ها" قادر است RNA نشاندار جدا شده از ویروس عفونی را پس از هیبریداسیون تبدیل به یک فرم کاملاً RNA-azoresistive (Scholtissek, Rott, 1969b). بنابراین، افزایش مقدار RNA با وزن مولکولی کم در ذرات ناقص ممکن است به دلیل RNA با وزن مولکولی بالا باشد که می تواند به صورت مولکول های تخریب شده و بنابراین غیرعملکردی در این ذرات گنجانده شود. این ایده توسط شواهدی تأیید می شود که با عبور رقیق نشده تشنه، ابتدا توانایی تولید ویروس عفونی کاهش می یابد، پس از آن سنتز هماگلوتینین، نورآمینیداز و در نهایت آنتی ژن RNP کاهش می یابد (Scholtissek et al., 1966).

نایاک (1972) دریافت که در طی اولین گذر با تعدد بالا، ویروسی که در ابتدا ظهور می‌کند کاملاً عفونی بوده و یک الگوی طبیعی از قطعات RNA ویروس عفونی در گرادیان ساکارز ارائه می‌دهد، در حالی که ویروسی که بعداً ظهور می‌کند دارای مشخصات RNA معمولی بود. ویروس ناقص (پس زمینه -magnus)1.

آنها انگل های داخل سلولی اجباری هستند، به این معنی که نمی توانند ژن های خود را بدون کمک تکثیر یا منتقل کنند. تک ذره ویروسی (ویریون) خود بی اثر است. هنگامی که یک ویروس یک سلول را آلوده می کند، از آنزیم ها و بیشتر ساختار سلول برای تکثیر استفاده می کند.

برخلاف آنچه در فرآیندهای تقسیم سلولی می بینیم مانند، تکثیر ویروسی فرزندان زیادی تولید می کند که سلول میزبان را از بین می برد و سپس سایر سلول های بدن را آلوده می کند.

مواد ژنتیکی ویروسی

ویروس ها ممکن است حاوی DNA یا RNA تک یا دو رشته ای باشند. نوع ماده ژنتیکی موجود در یک ویروس خاص به ماهیت و عملکرد آن بستگی دارد. ماهیت دقیق آنچه پس از آلوده شدن میزبان اتفاق می افتد بسته به ماهیت ویروس متفاوت است.

فرآیند تکثیر برای ویروس های دارای DNA دو رشته ای، DNA تک رشته ای، RNA دو رشته ای و RNA تک رشته ای متفاوت خواهد بود. به عنوان مثال، ویروس های DNA دو رشته ای معمولاً قبل از اینکه بتوانند تکثیر شوند باید وارد سلول های میزبان شوند. با این حال، ویروس‌های RNA تک رشته‌ای عمدتاً در سلول‌های میزبان تکثیر می‌شوند.

هنگامی که ویروس میزبان را آلوده می کند، اجزای نتاج ویروسی توسط ماشین های سلولی تولید می شوند و مونتاژ کپسید ویروسی یک فرآیند غیر آنزیمی است. ویروس ها معمولاً فقط می توانند تعداد محدودی از میزبان ها را آلوده کنند. مکانیسم "قفل و کلید" رایج ترین توضیح برای این پدیده است. پروتئین های خاصی روی ذره ویروسی باید با پروتئین های گیرنده خاصی در سطح سلول میزبان خاصی مطابقت داشته باشند.

ویروس ها چگونه سلول ها را آلوده می کنند؟

فرآیند اصلی عفونت و تکثیر ویروس در 6 مرحله انجام می شود:

• جذب - ویروس به سلول میزبان متصل می شود.
• ورود - ویروس ژنوم خود را به سلول میزبان وارد می کند.
• تکثیر ژنوم ویروسی - ژنوم ویروسی با استفاده از ساختار سلولی میزبان تکثیر می شود.
• مونتاژ - اجزاء و آنزیم های ویروسی تشکیل می شوند که شروع به جمع آوری می کنند.
• بلوغ - ویروس ها از اجزای مونتاژ شده ایجاد می شوند.
• خروج - ویروس های جدید در جستجوی قربانیان جدید برای عفونت از سلول میزبان خارج می شوند.

ویروس ها می توانند هر نوع سلولی را آلوده کنند، از جمله

در عنبیه آنفولانزا: رویدادها و پیش بینی ها

D.K. لووف، A.D. Zaberezhny، T.I. علیپر

دیمیتری کنستانتینوویچ لووف، آکادمی آکادمی علوم پزشکی روسیه، مدیر موسسه تحقیقات ویروس شناسی به نام A.I. DI. ایوانوفسکی RAMS، رئیس بخش ویروس شناسی آکادمی پزشکی مسکو. آنها سچنوف مدیر پروژه 05-04-52136, 06-04-48822.

الکسی دیمیتریویچ زابرجنی، دکترای علوم زیستی، رئیس آزمایشگاه تشخیص مولکولی همان موسسه، رئیس بخش بیولوژی مولکولی در NPO Narvak.

تاراس ایوانوویچ آلیپر، دکترای علوم زیستی، رئیس آزمایشگاه ابزارهای پیشگیری خاص از بیماری‌های ویروسی همان موسسه، مدیر NPO نارواک.

به اولین انتشار مقاله مراجعه کنید: طبیعت. 2006. شماره 6. صص 3-13.

اپیدمی های آنفولانزا سالانه رخ می دهد و به عنوان چیزی خارق العاده تلقی نمی شود. از آنجایی که این بیماری توسط ویروس هایی ایجاد می شود که قبلاً با سیستم ایمنی آشنا هستند، آن را

آنها معمولا به خوبی با هم کنار می آیند. بیماری همه گیر موضوع دیگری است: در این مورد، عامل ایجاد آنفولانزا ویروسی با خواص آنتی ژنی و بیولوژیکی جدید است که با سرعت رعد و برق در جهان پخش می شود و تا یک چهارم جمعیت کره زمین را تحت تأثیر قرار می دهد و ده ها میلیون نفر را می گیرد. این همه گیری "مشهور" قرن گذشته. پیش‌بینی آنها غیرممکن بود، همانطور که نمی‌توان زمان دقیق شروع یک جدید را نام برد.

با این حال، در حال حاضر، به لطف نظارت مداوم بر ویروس‌های در گردش در بین انسان‌ها، حیوانات اهلی و وحشی، و همچنین دانش به‌دست‌آمده با استفاده از روش‌های ژنتیک مولکولی، پیش‌بینی ظهور گونه‌های جدید ویروس با گرایش‌های همه‌گیر از قبل امکان‌پذیر است. در سال های اخیر، یک مدعی برای این نقش شناسایی شده است: در پایان سال 2003، ویروس مرغی H5N1 که در ابتدا غیر بیماری زا بود، باعث ایجاد اپیزوتیک آنفلوانزا در بین پرندگان اهلی شد که در این سال به پانزوتیک تبدیل شد. این ویروس شروع به آلوده کردن حیوانات دیگر از جمله انسان کرده است، اما تاکنون از فردی به فرد دیگر منتقل نمی شود. برای به دست آوردن این توانایی کافی است تنها یک اسید آمینه را در یکی از پروتئین های ویروسی جایگزین کنید.

ساختارهای ویریون

ویروس آنفولانزا ساختار نسبتاً ساده ای دارد: این یک ذره کروی (ویریون) با قطر حدود 0.13 میکرون در هسته است که حاوی نوکلئوکپسید (یک مولکول RNA بسته بندی شده در پوسته ای از پروتئین M1) است که توسط یک لیپید احاطه شده است. غشاء (شکل 1). سه پروتئین در این غشاء غوطه ور هستند - هماگلوتینین، نورآمینیداز و یک کانال یونی (پروتئین M2) که نقش عمده ای در فرآیند عفونی دارند.

هماگلوتینین اولین موردی است که با گیرنده های سلول میزبان در تماس است. بر روی سطح پاکت ویروسی، به شکل تریمرهای بسیار پیچیده ارائه می شود. هر یک از مونومرهای آنها به طور محکم در غشاء لنگر انداخته و شامل دو زیر واحد است - یکی از آنها تماس اولیه با سلول هدف را فراهم می کند، دیگری مسئول ادغام غشای ویروسی و سلولی است. در قسمت بالایی پروتئین، محل هایی وجود دارد که به اسید سیالیک، که بخشی از گیرنده سلول میزبان است، متصل می شود.

آنزیم نورآمینیداز گروه های انتهایی اسید سیالیک گیرنده های سلولی را جدا می کند و در نتیجه سلول توانایی تشخیص آنتی ژن را از دست می دهد و ویروس نفوذ می کند.

زیست شناسی و علوم پزشکی

ویروس‌های آنفلوانزا: رویدادها و پیش‌بینی‌ها

از طریق اندوسیتوز، روش معمول انتقال مواد به سلول، وارد آن می شود. محیط اسیدی اندوزوم جوانه زده از غشای سلولی، کانال یونی M2 را فعال می کند، که pH درون ذره ویروسی را کاهش می دهد، که منجر به تخریب پوسته پروتئین M1 می شود. در همان زمان، هماگلوتینین فعال می شود. این به شکل یک پیش ماده سنتز می شود که در یک محیط اسیدی به حالت بالغ می رسد - توسط آنزیم های پروتئولیتیک به دو زیر واحد تقسیم می شود ، در حالی که پپتید همجوشی پنهان در داخل تریمر تغییر شکل می دهد ، آزاد می شود و به انتهای بالایی حرکت می کند. از مولکول و وارد غشاء می شود. پوشش ویروسی با آندوزوم ادغام می شود، یک منفذ همجوشی تشکیل می شود که از طریق آن مسیری برای مواد ژنتیکی خارجی به داخل سیتوپلاسم باز می شود. سپس RNA ویروسی وارد هسته سلول می شود. در نتیجه فرآیندهای حیاتی در سلول مختل می شود و خود سلول با استفاده از منابع خود شروع به تولید پروتئین های ویروسی می کند. RNA ویروسی بلافاصله تکثیر می شود و ذرات ویروسی جدید جمع می شوند که با کمک نورآمینیداز از سلول های آسیب دیده آزاد می شوند (محصولات تجزیه آنها باعث مسمومیت بدن و حالت تب می شود) و همراه با جریان خون در سراسر بدن حمل می شوند.

شکل 1. طرح ویریون ویروس آنفولانزا. غشای لیپوپروتئین آن با خارهای دو گلیکوپروتئین - هماگلوتینین و نورآمینیداز پوشیده شده است. داخل آن نوکلئوکپسید، یک مولکول RNA است که در پوسته ای از پروتئین M1 پیچیده شده است. ژنوم از هشت قطعه تشکیل شده است که شش قطعه اول هر کدام یک پروتئین را کد می کنند (هماگلوتینین - HA، نورآمینیداز - NA، زیرواحدهای RNA پلیمراز - PB1، PB2، PA، نوکلئوپروتئین

NP)، و دو ژن آخر - دو پروتئین با توالی آمینه منحصر به فرد.

بدون اسید (پروتئین های ماتریکس - M1، M2 و پروتئین های غیر ساختاری - HS1، HS2).

ویروس تکثیر کننده سیستم خونساز و ایمنی را تحت فشار قرار می دهد، به اندوتلیوم مویرگی آسیب می رساند که منجر به افزایش نفوذپذیری عروق و خونریزی تا ادم مغزی با نتیجه کشنده می شود. اما این به ندرت اتفاق می افتد، سیستم ایمنی معمولاً روشن می شود - ابتدا عوامل ایمنی ذاتی (غیر اختصاصی) دخیل هستند و پس از مدتی، آنتی بادی های خاصی شروع به تولید می کنند که آزاد می کنند و پس از عفونت مجدد، از بدن محافظت می کنند. از ویروس

ویژگی بارز ویروس های آنفولانزا، تنوع بالای خواص آنتی ژنی است. پروتئین های داخلی ساختار ثابتی دارند و نوع ویروس (A، B و C) را تعیین می کنند. آنتی ژن های سطحی، برعکس، ناهمگن و متغیر هستند و به میزان بیشتری

زیست شناسی و علوم پزشکی

ویروس‌های آنفلوانزا: رویدادها و پیش‌بینی‌ها

آلت تناسلی، این مربوط به هماگلوتینین (H) است، که همراه با نورآمینیداز (N)، نوع فرعی ویروس (H1N1، H2N2، H3N2، و غیره) را تعیین می کند. تنوع آنتی ژنی پروتئین های سطحی به دلیل دو فرآیند ژنتیکی است - تغییرات رانش و تغییر در ژنوم ویروس.

تغییرات دریفت به دلیل جهش های نقطه ای در ژن های کد کننده هماگلوتینین و نورآمینیداز ایجاد می شود و منجر به تغییرات جزئی در ساختار این پروتئین ها می شود. به عنوان یک قاعده، چنین تغییراتی بین همه گیری ها در همه انواع ویروس ها (A، B و C) رخ می دهد. در نتیجه، همه‌گیری‌ها به جای بیماری‌های همه‌گیر هر ساله رخ می‌دهند، زیرا محافظت در برابر مواجهه قبلی با ویروس حفظ می‌شود، اگرچه کافی نیست.

تغییرات شیفت پس از جایگزینی کامل ژن رخ می دهد. این امکان پذیر است زیرا ژنوم ویروس آنفولانزا تقسیم بندی شده است - از هشت قطعه RNA خطی تک رشته ای تشکیل شده است که علاوه بر هماگلوتینین و نورآمینیداز، یک آنزیم ویژه ویروس (RNA پلیمراز یا ترانس کریپتاز، متشکل از سه زیر واحد را رمزگذاری می کند. - پروتئین های PB1، PB2، PA، و همچنین یک نوکلئوپروتئین (NP)، ماتریکس (M1 و M2) و پروتئین های غیر ساختاری (NS1 و NS2). هنگامی که یک سلول به طور همزمان با دو سویه مختلف آلوده می‌شود، بخش‌های ژنوم در حال تکثیر آن‌ها در هر ترکیبی با هم مخلوط می‌شوند، بنابراین ویریون‌های جدید شامل مجموعه‌های مختلفی از ژن‌های قرض‌گرفته‌شده از هر یک از ویروس‌های اصلی هستند. چنین ترکیبی از بخش‌های RNA ویروسی به هم ریختگی ژنتیکی یا طبقه‌بندی مجدد نامیده می‌شود، که نباید با اصطلاح موجود - نوترکیبی اشتباه گرفته شود، که در طی آن ماده ژنتیکی یا توسط مکانیسم متقاطع یا در نتیجه تغییر الگو مرتب می‌شود. تغییرات شیفت، به عنوان یک قاعده، بر ساختار آنتی ژنی هماگلوتینین، کمتر - نورآمینیداز تأثیر می گذارد. بنابراین، در فواصل نامنظم (10-40 سال)، ویروس هایی با خواص آنتی ژنی و بیولوژیکی جدید، از جمله انواع جدید همه گیر، ظاهر می شوند.

مانع گونه ها

در میان ویروس هایی که می توانند باعث ایجاد شرایط اپیدمی اضطراری شوند، مبارزه با آنها در مرحله وقوع آنها دشوار یا حتی غیرممکن است، ویروس های آنفولانزای A به ویژه خطرناک هستند. آنها با ناهمگونی آنتی ژنی بالای پروتئین های سطحی مشخص می شوند و مطابق با نامگذاری، توسط 16 نورآمینیداز (N1-9). این ویروس ها در طبیعت گسترده هستند و می توانند انواع پرندگان و برخی از انواع پستانداران (انسان، اسب، خوک، نهنگ، فوک و غیره) را آلوده کنند. عفونت پستانداران عمدتا از طریق دستگاه تنفسی، پرندگان - از طریق روده اتفاق می افتد. عفونت آنها معمولاً بدون علامت و یا به صورت انتریت است که نشان دهنده درجه بالایی از سازگاری متقابل ویروس های آنفولانزا و پرندگان وحشی است که می توان آنها را میزبان طبیعی آنها دانست. ویروس در آب، در دمای +22 درجه سانتیگراد - تا یک ماه، در دمای +4 درجه سانتیگراد و پایین تر - برای مدت طولانی تری (6 تا 8 ماه) باقی می ماند، بنابراین، مسیر آب-مدفوع عفونت مکانیسم اصلی عفونت است. حفظ گردش ثابت ویروس آنفولانزا در طبیعت.

با وجود ناهمگونی آنتی ژنی، ویروس ها با تمام ترکیبات شناخته شده پروتئین های سطحی تنها از پرندگان وحشی مجتمع های آبزی و نیمه آبی - اردک ها، مرغان دریایی و غیره جدا شده اند. (شکل 2).

در میان حیوانات دیگر، فقط ویروس‌هایی با مجموعه خاصی از پروتئین‌های سطحی در گردش هستند: برای مثال، ویروس‌های تنها سه زیرگروه هماگلوتینین (H1-H3) و دو نورآمینیداز (N1-N2) تا همین اواخر از انسان جدا شده‌اند. هر چهار بیماری همه گیر قرن بیستم به دلیل تغییرات جدیدی از این زیرگروه ها بود: "آنفولانزای اسپانیایی" در سال 1918 توسط ویروس آنفولانزای نوع A H1N1، "آنفولانزای آسیایی" در سال 1957 - H2N2، "آنفولانزای هنگ کنگ" در سال 1968 - H3N2 و "روسی" ایجاد شد. آنفولانزا» در سال 1977 - H1N1. همه آنها ترکیب مجدد ویروس های آنفلوانزای مرغی و انسانی هستند.

زیست شناسی و علوم پزشکی

ویروس‌های آنفلوانزا: رویدادها و پیش‌بینی‌ها

تا همین اواخر، اعتقاد بر این بود که ویروس های آنفلوانزای پرندگان برای انسان بیماری زا نیستند و در صورت آلوده شدن، فقط می توانند باعث التهاب ملتحمه و ضعف خفیف شوند، در موارد نادر، سندرم تنفسی خفیف. با این حال، در سال 1997، ویروس H5N1 باعث ایجاد بیماری بسیار شدید در بین مردم هنگ کنگ شد - از 18 نفری که بیمار شدند، 6 نفر مردند که همه آنها از جوجه ها آلوده شده بودند. دومین قسمت مشابه در فوریه 2003، همچنین در هنگ کنگ رخ داد - از پنج نفر مبتلا، دو نفر فوت کردند. ویروس های H5N1 به صورت دوره ای از جوجه ها و سایر گونه های پرندگان (از جمله پرندگان وحشی) در جمعیت های محلی جدا شده اند.

شکل 2. شماتیک گردش زیرگروه های شناخته شده ویروس های آنفولانزای A.

ویروس سروتیپ H9N2 که در بین طیور در چین و سایر کشورهای آسیایی شایع است، در پنج چینی در آگوست 1998 و یک سال بعد در هنگ کنگ در دو دختر مبتلا به بیماری آنفولانزا شناسایی شد. قابل ذکر است که تمامی موارد بیماری ها مستقل از یکدیگر رخ داده و انتقال ویروس از فردی به فرد دیگر مشاهده نشده است. در سال 1996، ویروس H7N7 آنفلوانزای مرغی از یک زن مبتلا به ورم ملتحمه جدا شد. یک مورد در هلند به مرگ ختم شد. اینها فقط مواردی هستند که به طور رسمی ثبت شده اند ، اما در واقعیت ، ویروس های آنفولانزای پرندگان ظاهراً بسیار بیشتر بر سد گونه ها غلبه می کنند و شروع به آلوده کردن نه تنها انسان ها، بلکه حیوانات دیگر (خوک ها، اسب ها، نهنگ ها، راسوها و غیره) می کنند. . موارد آلودگی پرندگان اهلی (مرغ، بوقلمون) با ویروس آنفولانزای مشخصه پرندگان وحشی به ویژه پرندگان آبزی شناخته شده است.

قضاوت با اطمینان درباره همه عواملی که دامنه میزبان های ویروس را محدود می کند و مکانیسم هایی که بر تغییر میزبان تأثیر می گذارد هنوز دشوار است. چنین جستجویی در حال انجام است و مدت زیادی است که در گروه های تحقیقاتی مختلف از جمله موسسه ما انجام شده است.

هماگلوتینین اولین مورد مشکوک بود، زیرا این گلیکوپروتئین است که مسئول شناسایی گیرنده های سلول میزبان است و در ادغام پوشش ویروسی با اندوزوم (در واقع بخشی از غشای سیتوپلاسمی سلول میزبان) نقش دارد. ساختار این گیرنده ها بسته به گونه و منشا بافتی سلول ها متفاوت است. این تفاوت ها در محدود کردن انتقال ویروس ها بین گونه ها مهم هستند و به طور خاص در ارتباط با ظهور ویروس های همه گیر انسانی جدید مورد بررسی قرار گرفته اند.

مشخص شده است که گیرنده های سلول های اپیتلیال دستگاه تنفسی انسان، علاوه بر پروتئین، حاوی کربوهیدرات ها - sialooligosaccharides هستند که در آنها اسید سیالیک انتهایی (N-acetylneuraminic acid) با یک پیوند 2'-6' به گالاکتوز متصل می شود. و گیرنده های سلولی

زیست شناسی و علوم پزشکی

ویروس‌های آنفلوانزا: رویدادها و پیش‌بینی‌ها

اپیتلیوم روده پرندگان - 2'-3'. ویروس های آنفلوانزای مرغی در انسان به خوبی تکثیر نمی شوند زیرا به سادگی نمی توانند به گیرنده های انسانی متصل شوند. در عین حال، موسین ها (طبعاً همان گلیکوپروتئین های پیچیده با اسید سیالیک در انتها)، که برای محافظت از ریه های انسان در برابر میکروارگانیسم ها لازم است، حاوی گیرنده هایی با پیوند گالاکتوز 2'-3' هستند. بنابراین، ویروس آنفلوانزای مرغی که به طور تصادفی وارد بدن انسان می شود، نمی تواند به سلول ها نفوذ کند، زیرا هیچ گیرنده خاصی روی سطح آنها وجود ندارد و فعالیت تشخیص گیرنده های ویریون توسط موسین مسدود می شود، بنابراین فرد در این مورد فقط با یک تهدید مواجه می شود. آبریزش خفیف بینی

اما در این مورد، چگونه می توان ظهور انواع تغییر همه گیری ویروس را توضیح داد؟ وقتی مشخص شد که سلول های دستگاه تنفسی خوک حامل هر دو نوع گیرنده هستند و بر این اساس، می توانند با ویروس های آنفلوانزای انسانی و پرندگان آلوده شوند، وضعیت کمی روشن شد. این بدان معنی است که خوک ها به طور بالقوه می توانند به عنوان یک میزبان میانی برای ویروس های مختلف و یک عرصه ایده آل برای دسته بندی مجدد آنها در عفونت های مختلط عمل کنند.

با توجه به هماگلوتینین، به نظر می رسد توانایی آن در تشخیص گیرنده های سلول میزبان در درجه اول به ساختار محل اتصال گیرنده (PCS) مربوط می شود. بنابراین، در ویروس های آنفلوانزای انسانی، PCC حاوی اسیدهای آمینه لوسین و سرین به ترتیب در موقعیت های 226 و 228 است، در حالی که در ویروس های پرندگان، این موقعیت ها گلوتامین و گلیسین است. جایگزین‌های اسید آمینه دیگری در PCC در حیوانات مختلف یافت شده است، به این معنی که اگرچه PCC حفظ شده و از نظر تکاملی پایدار است، اما همچنان دارای مناطق متغیری است که بر اتصال (میل) و ویژگی گیرنده تأثیر می‌گذارد.

RCC می تواند پس از غلبه ویروس بر سد بین گونه ای تغییر کند، در حالی که برای مثال، ویروس های آنفلوانزای پرندگان می توانند توانایی تشخیص گیرنده های سلولی انسانی را به دست آورند. شواهدی که نشان می دهد می توان بر مانع گونه پرنده و انسان غلبه کرد، شیوع آنفولانزای انسانی در سال 1997 در هنگ کنگ است که توسط ویروس H5N1 پرندگان ایجاد شد.

فرض بر این است که "اتصال" ویروس به میزبان نه تنها با ویژگی های هماگلوتینین، بلکه توسط پروتئین سطحی دیگر - نورآمینیداز تعیین می شود. علاوه بر این، دلایلی وجود دارد که باور کنیم ژن‌های پروتئین‌های داخلی و غیرساختاری ویروس‌های آنفولانزای A در محدود کردن دامنه میزبان‌ها دخیل هستند، با این حال، صحبت در مورد این موضوع خیلی زود است، زیرا هنوز لازم است نقش آن را مطالعه کنیم. هر ژن و عملکرد محصولات آنها. به هر حال، درک این نکته مهم است که حتی حداقل تغییرات در ساختار پروتئین های ویروسی، به ویژه هماگلوتینین، می تواند منجر به تغییرات قابل توجهی نه تنها در محدوده میزبان ویروس، بلکه در درجه بیماری زایی آن (حادثه) شود. ).

بیماری زاست

به یاد بیاورید که برای تولید مثل ویروس در بدن میزبان، فعال شدن پیش ساز مولکول هماگلوتینین ضروری است، در حالی که توسط پروتئازهای میزبان به دو زیر واحد تقسیم می شود. پروتئولیز هماگلوتینین ویروس های پرندگان کم بیماری زا در تعداد محدودی از انواع سلولی رخ می دهد، بنابراین ویروس فقط در مجاری تنفسی یا روده ای موضعی است. این با عفونت های بدون علامت یا متوسط ​​اتفاق می افتد. هماگلوتینین های ویروس های پرندگان بسیار بیماری زا در سلول های مختلف تجزیه می شوند و بنابراین قادر به ایجاد عفونت های سیستمیک کشنده به خصوص در طیور هستند.

در آزمایشگاه‌های مختلف در سراسر جهان، آنها شروع به مطالعه ژنوم سویه‌های ویروس آنفولانزا کردند که برای انسان بسیار بیماری‌زا هستند (H5N1 و H7N7، جدا شده در سال‌های 1997-2004). مشخص شد که این ویروس ها حاوی چندین اسید آمینه اساسی در محل برش مولکول هماگلوتینین هستند که فعالیت عفونی و بیماری زایی بالایی برای آنها فراهم می کند. بر خلاف ویروس های غیر بیماری زا یا ضعیف بیماری زا که دارای این توالی اسید آمینه نیستند، هماگلوتینین ویروس های بسیار بیماری زا نه تنها توسط پروتئازهای شبه تریپسین موجود در سلول های دستگاه تنفسی انسان و روده پرندگان به راحتی جدا می شود، بلکه همچنین توسط پروتئازهای فورین مانند. آنها به صورت ترکیبی عمل می کنند

زیست شناسی و علوم پزشکی

ویروس‌های آنفلوانزا: رویدادها و پیش‌بینی‌ها

با یوبیکوئیتین، طراحی شده برای علامت گذاری پروتئین ها برای پروتئازهایی که باید از بین بروند. پروتئازهای شبه فورین در بافت های مختلف سنتز می شوند که به ویروس های بیماری زا توانایی آلوده کردن سیستم ها و اندام های مختلف را می دهد. قرار دادن حتی یک اسید آمینه پایه در محل برش پروتئولیتیک هماگلوتینین برای تبدیل یک ویروس کم بیماری زا به یک ویروس بسیار بیماری زا کافی است.

متعاقباً، این موضوع در آزمایش‌هایی بر روی موش‌های آلوده به انواع مختلف (جدا شده در سال‌های مختلف) ویروس H5N1 تأیید شد. برخی از آنها شروع به تکثیر در مغز، کبد، طحال، سلول های خونی کردند که باعث مرگ 100% موش ها در روز هفتم تا هشتم پس از عفونت شد، در حالی که سایر ویروس ها برای موش ها غیر بیماری زا بودند و تنها در ریه ها تکثیر می شدند. به زودی، این توضیح داده شد - در ویروس های H5N1 جدا شده در سال 2004، در مقایسه با ویروس های به دست آمده در 1997-2003، جهش های اضافی در ژن هماگلوتینین شناسایی شد که بر تغییر در خواص آنتی ژنی آنها تأثیر گذاشت.

بیماری زایی ویروس می تواند تحت تأثیر تغییرات در ساختار نه تنها سطح، بلکه پروتئین های داخلی نیز قرار گیرد. به عنوان مثال، یک جهش در موقعیت 627 در پروتئین PB2 در سویه ای از ویروس آنفولانزا H5N1 یافت شد که برای موش ها بسیار بیماری زا است. این جهش بود که بر تفاوت در خواص دو ویروس H5N1 جدا شده در هنگ کنگ و در نتیجه، نتیجه فرآیند عفونی تأثیر گذاشت. علاوه بر این، حدت این ویروس‌های آنفلوانزا با ویژگی‌های ساختاری پروتئین غیرساختاری NS، به ویژه با حضور اسید گلوتامیک در موقعیت 92 در مولکول آن مرتبط است، که ویروس‌ها را در برابر اثر ضد ویروسی اینترفرون‌ها مقاوم می‌کند.

البته استفاده از روش‌های مدرن ژنتیکی مولکولی در مطالعه ویروس‌های آنفولانزا به تدریج ویژگی‌های بیولوژیکی آن‌ها را روشن می‌کند، اما روش‌های سنتی که بر گردش ویروس‌های آنفلوانزا در بین مردم، حیوانات اهلی و وحشی نظارت می‌کنند، اهمیت کمتری ندارند. پیش‌بینی ظهور ترکیب‌های مجدد با گرایش‌های همه‌گیر و توسعه اقدامات مؤثر برای پیشگیری و کنترل آنفولانزا تنها بر اساس مطالعه اکولوژی و تکامل عوامل ایجادکننده این بیماری عفونی دشوار قابل پیش‌بینی و کنترل دشوار است. . چنین مطالعاتی بیش از 35 سال پیش توسط G. Laver در استرالیا، R. Webster در ایالات متحده آمریکا، D.K. Lvov در کشور ما، و آنها تا به امروز در سراسر جهان انجام می شود.

رویدادها و پیش بینی ها

یک مطالعه جامع از ویروس های آنفولانزای A توسط سازمان بهداشت جهانی (WHO) پس از همه گیری سال 1968 که توسط ویروس H3N2 ایجاد شد، آغاز شد. موسسه ما دریافت که مولد H3N2 سویه ای شبیه به ویروس H3N8 است که در سال 1963 در اوکراین از اردک های وحشی جدا شده بود. این داده ها و سایر داده ها به عنوان پایه ای برای توسعه جهت علمی - اکولوژی و تکامل ویروس های آنفولانزای A عمل کردند. تایید عدم وجود تفاوت های اساسی بین ویروس آنفولانزای انسانی و حیوانی A، t.e. وجود یک مخزن ژنی محافظت شده بر اساس این داده ها، در سال 1980 یک طبقه بندی از ویروس های آنفولانزا، صرف نظر از منشاء آنها ایجاد شد. از آن زمان به بعد، به هر ویروس جدا شده نامی اختصاص داده شده است که نشان دهنده نوع ویروس، منبع جداسازی، مکان و سال جداسازی و همچنین یک نوع فرعی است - به عنوان مثال، A / duck / Ukraine / 63 (H3N8).

هدف اصلی تحقیق ما در روسیه بررسی تکامل ویروس‌های آنفولانزای A در فرآیند تعامل جمعیت‌های ویروسی با جمعیت پرندگان وحشی و حیوانات اهلی و تشکیل سویه‌هایی با قدرت اپیدمی بود. برای انجام این کار، نظارت در نقاط کلیدی در شمال اوراسیا انجام می شود. 14 از 16 ویروس شناخته شده جدا شد

در پایان سال 2003، یعنی. سه ماه قبل از شروع همه گیری ناشی از ویروس آنفلوانزای مرغی H5N1 در کشورهای جنوب شرقی آسیا، یکی از نویسندگان این مقاله (D.K. Lvov) در کنگره بین المللی آنفلوانزا در ژاپن سخنرانی کرد و در مورد جداسازی این ویروس ها گزارش داد.

زیست شناسی و علوم پزشکی

ویروس‌های آنفلوانزا: رویدادها و پیش‌بینی‌ها

از پرندگان وحشی در روسیه - در آلتای و در جنوب Primorye. با توجه به داده های ژنتیکی مولکولی، این سویه ها به عنوان بیماری زا پایین طبقه بندی می شوند. سپس، با قیاس با مشاهدات قبلی، اولین پیش بینی در مورد امکان ورود آنها با پرندگان مهاجر به مرغداری های جنوب شرقی آسیا انجام شد، جایی که پس از مدتی آنها می توانند به شدت بیماری زا با قدرت پانزوتیک و همه گیر تبدیل شوند. ظاهراً همین اتفاق افتاده است. شیوع بیماری همه گیر در مدت کوتاهی 10 کشور را در بر گرفت. از آن زمان تاکنون بیش از 150 میلیون مرغ و اردک کشته و سلاخی شده اند. طبق گزارش WHO، تا پایان مارس 2006، 185 نفر قبلاً مبتلا شده بودند که 104 نفر از آنها جان خود را از دست دادند. اپیزوتیک ادامه دارد و ویروس ها به جمعیت خوک ها نفوذ کرده اند که نگرانی خاصی دارد. شاید جهان در آستانه یک فاجعه اپیدمیولوژیک باشد: زمانی که خوک ها همزمان با ویروس H5 پرندگان و ویروس های H1 یا H3 آنفلوانزای انسانی که در سراسر جهان در گردش هستند، آلوده شوند، می توانند مجدداً تشکیل شوند.

پیش بینی دوم نیز انجام شد: در صورت آلودگی در مناطق زمستان گذران پرندگان وحشی با گونه های بسیار بیماری زا، خطر ورود آنها به قلمرو روسیه، به ویژه به سیبری و خاور دور، در طول مهاجرت های بهاری افزایش می یابد. و بعد اتفاقی افتاد که قرار بود بیفتد. در اواسط ژوئیه 2005، در سکونتگاه های منطقه نووسیبیرسک، واقع در استپ جنگلی شمالی دریاچه در دشت بارابا، یک بیماری همه گیر در بین طیور با نرخ مرگ و میر بیش از 90٪ و گسترش سریع تشخیص داده شد.

مواد از پرندگان اهلی و وحشی که در مجاورت محل اپیزوتیک زندگی می کردند جمع آوری شد. با استفاده از رده‌های سلولی SPEV و MDCK (این روش غیر استاندارد در حال حاضر در حال ثبت اختراع است)، ما شش سویه H5N1 را از طیور و گرب‌ها (Podiceps cristatus) با غلظت‌های بسیار بالای ویروس در بافت جدا کردیم. با اولویت 8 آگوست 2005، این سویه ها در مجموعه ایالتی ویروس ها سپرده شدند و داده های توالی ژنوم تمام قد آنها با اولویت 5 سپتامبر 2005 در GenBank سپرده شد. محل برش پروتئولیتیک هماگلوتینین تمام سویه های به دست آمده حاوی توالی اسید آمینه PQGERRRKKRGLF است که مشخصه ویروس های آنفلوانزای پرندگان بسیار بیماری زا است. توالی‌های نوکلئوتیدی ژن‌های هماگلوتینین همه ویروس‌های طیور تجزیه‌وتحلیل‌شده کاملاً یکسان بودند، اما با سویه جدا شده از پرنده وحشی (خرچنگ کاکل‌دار) تفاوت دارند، البته تنها با دو جایگزینی نوکلئوتیدی (شکل 3). تجزیه و تحلیل فیلوژنتیک سطح بالایی از همسانی هماگلوتینین های سویه های سیبری غربی را با سویه های جدا شده در بهار همان سال از غاز کوهی (Anser indicus) در دریاچه نشان داد. کوکونور در استان شمال غربی چینگهای (PRC). این به طور کامل با تجزیه و تحلیل هفت ژن باقی مانده تایید شد.

هویت ویژگی های ژنتیکی سویه های جدا شده رابطه مستقیم بین ویروس های در گردش در جمعیت پرندگان وحشی و اهلی را ثابت می کند. در عین حال، سویه های ویروس آنفولانزای H5N1 کشف شده در سال 2005 به طور قابل توجهی با سویه های این ویروس جدا شده در سال های گذشته متفاوت است، از جمله سویه A/Vietnam/1194/2004 (H5N1) به دست آمده از انگلستان، که در ما ارائه می شود. کشور تولید واکسن واضح است که حداقل برای یک واکسن دامپزشکی، فقط می توان از یک سویه از مجموعه دولتی ویروس ها استفاده کرد که از نظر خواص آنتی ژنی با ویروس در گردش در روسیه مطابقت دارد.

سویه ای که ما جدا کردیم و در مجموعه ویروس دولتی سپرده شد، در حال حاضر برای تولید واکسن در مقیاس بزرگ در مرغداری استاوروپل استفاده می شود. پرندگان اهلی در ناحیه فدرال جنوبی واکسینه می شوند. تا 15 ژوئن 2006، برنامه ریزی شد که 15 میلیون دوز واکسن با گسترش بیشتر تولید تولید شود.

به هر حال، در یک بیماری همه گیر، زمانی که لازم است به سرعت تولید واکسن ایجاد شود، به نظر ما، توصیه می شود از رده های سلولی بستری استفاده کنیم که در آن ویروس آنفولانزا به سرعت در غلظت های بالا تجمع می یابد. این روش جدید توسعه یافته دارای مزایای قابل توجهی نسبت به روش سنتی است که استفاده می کند

زیست شناسی و علوم پزشکی

ویروس‌های آنفلوانزا: رویدادها و پیش‌بینی‌ها

از جنین مرغ استفاده می شود: واکسن کشت ضمن حفظ تمام حوزه های آنتی ژنی هماگلوتینین، بروز عوارض مرتبط با پروتئین مرغ را از بین می برد. این امر به ویژه در تولید واکسن های انسانی اهمیت دارد. فقط باید بدانید از کدام سویه باید برای ایمن سازی افراد استفاده کرد. این بستگی به خصوصیات آنتی ژنی واریانت پاندمی حاصله دارد. شاید با آنچه الان هست فرق کند. در هر صورت، استفاده از واکسن زنده کاملا غیرقابل قبول است. تعامل ژنتیکی بین واکسن و ویروس‌های مزرعه می‌تواند منجر به ترکیب‌های مجدد با پیامدهای غیرقابل پیش‌بینی شود.

شکل 3. میزان ارتباط توالی‌های نوکلئوتیدی ژن هماگلوتینین گونه‌های H5 ویروس آنفلوانزا نوع A جدا شده از پرندگان وحشی و اهلی در کشورهای مختلف طی 10 سال گذشته. سویه‌های بسیار بیماری‌زای H5N1 از گروه ویروس‌های Qinghai-Novosibirsk به صورت پررنگ مشخص شده‌اند.

تجزیه و تحلیل ژنوم سویه هایی که ما جداسازی کردیم تعدادی از ویژگی های مرتبط با خواص بیولوژیکی را نشان داد. علاوه بر توالی اسید آمینه محل برش پروتئولیتیک هماگلوتینین، که سطح بالای بیماریزایی ویروس را تعیین می کند، حذف در موقعیت 49-68 در نورآمینیداز (ژنوتیپ Z) یافت شد که نشان دهنده افزایش تروپیسم ویروس های جدا شده توسط ما به طیور و بیماری زایی بالقوه برای انسان. اسید گلوتامیک در موقعیت 92 پروتئین NS1 مقاومت ویروس را در برابر عمل اینترفرون و افزایش حدت برای خوک ها تعیین می کند. لیزین در موقعیت 627 پروتئین PB2 توانایی سویه های مورد مطالعه را برای تکثیر در رده های سلولی مختلف پستانداران توضیح می دهد. خواص آشکار ویروسی که به خاک روسیه نفوذ کرده است گواهی بر بیماری زایی بالای آن در رابطه با پرندگان اهلی و مردم است.

وجود سرین، به جای آسپاراژین، در موقعیت 31 M2 نشان دهنده حساسیت ویروس به ریمانتادین است که کاملاً با داده های یک مطالعه مستقیم از تأثیر داروهای ضد ویروسی بر تولید مثل ویروس مطابقت دارد. برای این منظور، ما همچنین از خطوط سلولی استفاده کردیم و متوجه شدیم که برای پیشگیری و درمان زودرس آنفولانزا، آنها به همان اندازه مؤثر هستند و می توانند به عنوان داروهای خارجی گران قیمت - به عنوان مثال، تامیفلو، و همچنین داروهای نسبتا ارزان داخلی که در دسترس هستند، استفاده شوند. داروخانه ها - ریمانتادین،

زیست شناسی و علوم پزشکی

ویروس‌های آنفلوانزا: رویدادها و پیش‌بینی‌ها

ویرازول (با کاربرد داخل وریدی و آئروسل)، آربیدول. متأسفانه در حال حاضر تولید این داروها در کشور وجود ندارد یا کافی نیست و ایجاد ذخایر استراتژیک آنها ضروری است.

ویروس آنفولانزای بسیار بیماری زا H5N1 چگونه و چه زمانی وارد روسیه شد و رویدادهای بعدی چگونه رخ خواهد داد؟

شکل 4. مسیرهای انتشار ویروس آنفولانزای H5N1 در جمعیت پرندگان وحشی و اهلی. ویروس‌های آنفلوانزای کم بیماری‌زا (LPVV) جدا شده از پرندگان وحشی و اهلی در منطقه شمال شرقی منطقه آلتای در سال 1991 و در جنوب منطقه پریمورسکی در سال 2001 ظاهراً پیش‌آزمون شیوع آنفولانزای 1997 در هنگ‌کنگ و اپیزوتیک‌ها در جنوب آسیا30 بودند. -2005، و همچنین در شمال غربی چین در سال 2005. این ویروس ها پس از تبدیل شدن به بسیار بیماری زا (HPA)، در طول مهاجرت بهاری پرندگان وحشی به سیبری غربی، جایی که در تابستان 2005 باعث شیوع آنفولانزا در بین طیور شدند، نفوذ کردند. در طول دوره مهاجرت پرندگان مجتمع آبزی و نیمه آبی، HPVH بیشتر به شمال و غرب اوراسیا گسترش یافت و در زمستان سال 2006، این ویروس ها قبلاً در آفریقا شناسایی شدند. فلش های ضخیم نشان دهنده عفونت با ویروس آنفولانزا از طبیعت است

پرندگان به پرندگان اهلی و بالعکس.

اول، سویه های کم بیماری زا در سیبری و خاور دور در میان پرندگان وحشی در جریان مهاجرت های پاییزی به کشورهای جنوب شرقی آسیا معرفی شدند (شکل 4). آنها که در آنجا بسیار بیماری زا شدند، همراه با پرندگان وحشی، در بهار سال 2005 وارد سیبری غربی شدند و در طول دوره لانه سازی به شدت تشدید شدند. سویه های بسیار بیماری زا با پرندگان به مکان های لانه سازی در مساحتی بیش از 10 میلیون هکتار پراکنده شده اند.

کیلومتر مربع پس از اینکه ویروس به جمعیت طیور برخورد کرد، یک انفجار اپیزوتیک رخ داد. این جدی و برای مدت طولانی است.

سومین پیش‌بینی این بود که وقتی پرندگان در پاییز از طریق مناطق پرجمعیت روسیه و سایر کشورها به مناطق زمستانی خود برگردند، دوباره ویروس را منتشر خواهند کرد.

زیست شناسی و علوم پزشکی

ویروس‌های آنفلوانزا: رویدادها و پیش‌بینی‌ها

و همینطور هم شد. در پاییز 2005، این ویروس قبلاً به اکثر کشورهای اروپایی رسیده بود؛ همچنین در ترکیه، کریمه، ایران، آذربایجان، گرجستان، هند و همچنین در آفریقا یافت شد. و به تولا، کالمیکیا و دلتای ولگا رسیدیم، جایی که در دسامبر 2005 پس از توقف کوتاه پرواز اردک های شمالی - اردک های کاکل دار (Aythya fuligula) شیوع آنفولانزا در جمعیت قوهای گنگ (Cygnusolor) ایجاد شد. سویه های جدا شده از قوها، با توجه به تجزیه و تحلیل ژنتیکی مولکولی آنها، نیز به گروه ویروس های سیبری غربی Qinghai-West تعلق دارند. برای نیم سال گردش در بین پرندگان وحشی، سویه ها ژنوتیپ خود را حفظ کردند و بیماری زایی بالای خود را از دست ندادند.

چهارمین پیش بینی نگران کننده ترین است. این ویروس بسیاری از مخازن را در مناطق لانه سازی و مسیرهای مهاجرت آلوده کرده است و تا بهار در آنجا باقی خواهد ماند. هر آب طبیعی که در آن مدفوع پرندگان آلوده افتاده است به یک "بمب ساعتی" تبدیل می شود. این را می توان با دخالت زمین های تورب در آتش تایگا مقایسه کرد. در بهار، پرندگان آلوده و سالم برمی گردند و از میان این "میدان های مین" پرواز می کنند، بنابراین رویدادهای تابستان 2006 ممکن است بسیار وحشتناک تر از فصل گذشته باشد. این امر با وخامت بهمن مانند وضعیت در اروپا، آسیا و آفریقا در ماه مارس تأیید می شود. این پانزوتیک است. و هنگامی که سویه های بسیار بیماری زا که در بهار در بین پرندگان وحشی در گردش هستند به سویه های بیماری زا کم باز می گردند، نمی توان پیش بینی کرد که روند طبقه بندی مجدد آنها چقدر طول می کشد - ماه ها یا سال ها. واضح است که این موضوع اولویت مطالعه است که توسعه رویدادها در آینده قابل پیش بینی به آن بستگی دارد.

در مورد ویروس همه گیر، همچنین می تواند پس از آلوده شدن خوک ها به ویروس های انسانی و پرندگان در ما ایجاد شود. اما به احتمال زیاد از چین به ما خواهد رسید، جایی که با توجه به فعالیت فرآیند اپیزوتیک و گروه حساس بسیار زیاد در بین جمعیت، امکانات برای تبدیل مجدد reassortant بسیار زیاد است. یک ویروس همه گیر می تواند هر لحظه در کشور ما ظاهر شود - برای این، تنها یک جایگزینی اسید آمینه در RCC هماگلوتینین کافی است، در نتیجه، ویروس شروع به شناسایی گیرنده های سلول های انسانی می کند و بر این اساس، شروع به شناسایی می کند. از فردی به فرد دیگر منتقل شود.

آنچه از دیدگاه ما اکنون باید در سطح ایالت انجام شود، در جدول فرمول بندی شده است. ما قصد داریم به مطالعه تکامل بیشتر سویه های بسیار بیماری زا که جمعیت پرندگان وحشی را تحت تاثیر قرار داده اند، توجه ویژه ای داشته باشیم. اکوسیستم های موجود در قلمرو روسیه در این امر نقش اساسی دارند. ما قصد داریم به نظارت در بخش اروپایی کشور، در سیبری و خاور دور و همچنین احتمالاً در برخی از کشورهای همسایه ادامه دهیم.

در پنج سال گذشته، تحقیقات ما به طور مشترک با شکارچیان، پرنده شناسان، کارمندان خدمات فدرال نظارت بر دامپزشکی گیاهی و بهداشتی و اپیدمیولوژیک مناطق نووسیبیرسک، آستاراخان، ایرکوتسک، منطقه پریمورسکی، بیروبیژان، جمهوری های کالمیکیا و بوریاتی انجام شده است. . همه اینها در چارچوب برنامه های فدرال "محافظت از عوامل بیماری زا"، "توسعه وسایل و روش های مقابله با بیوتروریسم"، "آنفولانزای A خوک ها و پرندگان: تعامل جمعیت ها" صورت گرفت.